小鼠脑缺血再灌注模型的建立
摘要：缺血再灌注损伤(ischem ia reperfusion injury,IR I)是指遭受一定时间缺血的组织恢复血供后, 组织损伤程度加重的病理现象。近年来众多学者对小鼠脑缺血模型的制备方法进行了研究。模型多采用可逆性阻断双侧颈总动脉为主造成小鼠短暂性全脑缺血再灌注模型；或采用线栓法阻断局部血流造成小鼠局灶性脑缺血再灌注模型[1,2]。
关键词：脑缺血再灌注模型；小鼠；综述
【中图分类号】R743.31 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783(2012)06-0135-01
脑缺血再灌注模型是研究缺血性脑血管疾病病理生理学机制和防治措施不可缺少的工具,以往多采用大鼠作为研究对象。而近年来,由于小鼠体重差异小,模型成功率较高,且接近于人类脑供血不足或脑梗塞再灌时脑组织病理生理演变过程,故学者们纷纷采用小鼠制作脑缺血再灌注模型。本文将近年来众多学者对此模型的制备方法做一综述。
1 双侧颈总动脉夹闭法构建脑缺血再灌注损伤模型
按小鼠质量用0.04ml/10g10%的水合氯醛腹腔注射麻醉后常规消毒颈部皮肤，待小鼠无翻正反射后仰卧固定于手术台上, 保持呼吸通畅, 常规消毒, 经颈部做正中切口, 切开皮肤和皮下组织, 钝性分离二腹肌和胸锁乳突肌, 暴露颈动脉鞘, 然后小心分离双侧颈总动脉及迷走神经约, 并于颈总动脉下穿以零号丝线, 备用。提拉丝线, 以无创伤性微动脉夹夹闭颈总动脉阻断血流 15 min, 然后去除, 恢复灌注15 min, 如此反复3次。最后缝合皮肤,消毒,以青霉素肌注抗炎。
2 线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型
按小鼠质量用0.04ml/10g10%的水合氯醛腹腔注射麻醉后常规消毒颈部皮肤，将小鼠仰卧固定在蛙板上，切开皮肤皮下组织,暴露二腹肌肌腹和胸锁乳突肌,寻找到CCA,分离CCA 并保护迷走神经节,结扎CCA 近心端,向上分离右ECA 与ICA,用小血管夹夹住CCA 远心端(CCA结扎处与上血管夹处保持5 mm 左右距离),在此处放置一打好结的备用丝线,勿收紧线结,在此线下端剪一小口,插入已制备好的栓线头端,收紧线结,松去血管夹,在近CCA 分叉处用眼科镊暂时夹闭ECA,同时顺CCA 经ICA 将栓线送至颅内,遇阻力而止。恢复灌注 15 min, 如此反复 3 次，缝合颈部皮肤，适宜条件饲养。
3 模型比较
综上所述,用动脉夹阻断小鼠颈动脉法能够可逆性阻断脑动脉血流,造成缺血再灌注模型。双侧颈总动脉夹闭法因其操作简单、损伤较小, 动物死亡率低, 模型成功率高, 缺血和再灌注时间易于控制,能很好模拟人类脑梗塞再灌时脑组织病理生理的演变过程等优点倍受学者们的青睐，但缺血部位不太恒定,和小鼠品种、脑血管形态等因素有关[3,4]。插线法能可逆性阻塞大脑中动脉起始处,能使缺血部位较恒定,可准确控制缺血和再灌注的时间线栓法制作该模型,具有不开颅、效果肯定且可准确控制缺血及再灌注时间,便于分析神经元对缺血敏感性、耐受性及研究再灌注损害和治疗时间窗选择的优点。但插线法则需要显微外科操作,技术要求较高,因此一直未能在小鼠模型中推广使用。
4 体会和展望
研究者们对缺血和再灌注的时间不统一,差异较大,未进行系统性的研究和评价,故有些生化指标不稳定,病理变化的程度不易掌握,这在今后的研究中需继续探索。而且小鼠毕竟同人体有很大差异,与临床中的实际情况还有一定差距。临床上脑血管病多为老年人发病。而在实验中,由于老年鼠耐受性差,模型制作重复性差,因此大多数研究多采用青年鼠为实验对象[5]。但青年鼠和老年鼠存在一定的差异,在以后的研究中也要注意到这一因素。
参考文献
[1] 马丛, 王蕾. 小鼠脑缺血再灌注模型方法及中药的药理作用[J].中华中医药学刊, 2008,26(2):280-282
[2] 高大宽, 章翔, 蒋晓帆, 等. 小鼠脑 Willis环的解剖及其对局灶性脑缺血模型的影响[J]. 陕西医学杂志, 2006, 35(1):3-5
[4] 王梧霖, 史小军, 侯天德, 等. 小鼠脑缺血再灌注模型的构建及条件优化[J].现代生物医学进展,2010, 10(1):70-73
[5] 蔡竖平, 桂秋萍, 韩志涛, 等. 脑缺血再灌注后小鼠海马神经元两种不同的形态学改变[J]. 中国临床康复, 2004, 8(34):7686-7687, http://www.100md.com(周长征)
关键词：脑缺血再灌注模型；小鼠；综述
【中图分类号】R743.31 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783(2012)06-0135-01
脑缺血再灌注模型是研究缺血性脑血管疾病病理生理学机制和防治措施不可缺少的工具,以往多采用大鼠作为研究对象。而近年来,由于小鼠体重差异小,模型成功率较高,且接近于人类脑供血不足或脑梗塞再灌时脑组织病理生理演变过程,故学者们纷纷采用小鼠制作脑缺血再灌注模型。本文将近年来众多学者对此模型的制备方法做一综述。
1 双侧颈总动脉夹闭法构建脑缺血再灌注损伤模型
按小鼠质量用0.04ml/10g10%的水合氯醛腹腔注射麻醉后常规消毒颈部皮肤，待小鼠无翻正反射后仰卧固定于手术台上, 保持呼吸通畅, 常规消毒, 经颈部做正中切口, 切开皮肤和皮下组织, 钝性分离二腹肌和胸锁乳突肌, 暴露颈动脉鞘, 然后小心分离双侧颈总动脉及迷走神经约, 并于颈总动脉下穿以零号丝线, 备用。提拉丝线, 以无创伤性微动脉夹夹闭颈总动脉阻断血流 15 min, 然后去除, 恢复灌注15 min, 如此反复3次。最后缝合皮肤,消毒,以青霉素肌注抗炎。
2 线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型
按小鼠质量用0.04ml/10g10%的水合氯醛腹腔注射麻醉后常规消毒颈部皮肤，将小鼠仰卧固定在蛙板上，切开皮肤皮下组织,暴露二腹肌肌腹和胸锁乳突肌,寻找到CCA,分离CCA 并保护迷走神经节,结扎CCA 近心端,向上分离右ECA 与ICA,用小血管夹夹住CCA 远心端(CCA结扎处与上血管夹处保持5 mm 左右距离),在此处放置一打好结的备用丝线,勿收紧线结,在此线下端剪一小口,插入已制备好的栓线头端,收紧线结,松去血管夹,在近CCA 分叉处用眼科镊暂时夹闭ECA,同时顺CCA 经ICA 将栓线送至颅内,遇阻力而止。恢复灌注 15 min, 如此反复 3 次，缝合颈部皮肤，适宜条件饲养。
3 模型比较
综上所述,用动脉夹阻断小鼠颈动脉法能够可逆性阻断脑动脉血流,造成缺血再灌注模型。双侧颈总动脉夹闭法因其操作简单、损伤较小, 动物死亡率低, 模型成功率高, 缺血和再灌注时间易于控制,能很好模拟人类脑梗塞再灌时脑组织病理生理的演变过程等优点倍受学者们的青睐，但缺血部位不太恒定,和小鼠品种、脑血管形态等因素有关[3,4]。插线法能可逆性阻塞大脑中动脉起始处,能使缺血部位较恒定,可准确控制缺血和再灌注的时间线栓法制作该模型,具有不开颅、效果肯定且可准确控制缺血及再灌注时间,便于分析神经元对缺血敏感性、耐受性及研究再灌注损害和治疗时间窗选择的优点。但插线法则需要显微外科操作,技术要求较高,因此一直未能在小鼠模型中推广使用。
4 体会和展望
研究者们对缺血和再灌注的时间不统一,差异较大,未进行系统性的研究和评价,故有些生化指标不稳定,病理变化的程度不易掌握,这在今后的研究中需继续探索。而且小鼠毕竟同人体有很大差异,与临床中的实际情况还有一定差距。临床上脑血管病多为老年人发病。而在实验中,由于老年鼠耐受性差,模型制作重复性差,因此大多数研究多采用青年鼠为实验对象[5]。但青年鼠和老年鼠存在一定的差异,在以后的研究中也要注意到这一因素。
参考文献
[1] 马丛, 王蕾. 小鼠脑缺血再灌注模型方法及中药的药理作用[J].中华中医药学刊, 2008,26(2):280-282
[2] 高大宽, 章翔, 蒋晓帆, 等. 小鼠脑 Willis环的解剖及其对局灶性脑缺血模型的影响[J]. 陕西医学杂志, 2006, 35(1):3-5
[4] 王梧霖, 史小军, 侯天德, 等. 小鼠脑缺血再灌注模型的构建及条件优化[J].现代生物医学进展,2010, 10(1):70-73
[5] 蔡竖平, 桂秋萍, 韩志涛, 等. 脑缺血再灌注后小鼠海马神经元两种不同的形态学改变[J]. 中国临床康复, 2004, 8(34):7686-7687, http://www.100md.com(周长征)