肿瘤转移抑制基因KAI1在上皮性卵巢癌中的表达及相关性研究(1)
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[摘要]目的探讨肿瘤转移抑制基因KA11在上皮性卵巢癌中的表达，分析它与卵巢癌临床病理资料之间的关系，探索它在卵巢癌发生、发展过程中的作用。方法 应用免疫组织化学链真菌抗生物素一过氧化物酶连接法(S-P法)对上皮性卵巢癌组织中KA11蛋白的表达情况进行检测，结合肿瘤的病理学行为和临床随访资料进行综合分析。结果KA11蛋白在上皮性卵巢癌中的阳性与在正常卵巢组织、良性上皮性卵巢肿瘤组织中的表达比较差别均有统计学意义(P<0.05)。KA11蛋白在上皮性卵巢癌组中的表达与临床分期、组织学分级、有无淋巴结转移及有无腹水密切相关(P<0.05)，而与年龄、病理类型无关(P>0.05)。结论 KA11蛋白有望成为上皮性卵巢癌的早期诊断及病情监测的生物学指标，通过对这种蛋白表达的检测有助于筛选可能发生卵巢癌转移的高危人群，指导临床随诊和治疗。KA11蛋白的表达与上皮性卵巢癌的演变和转移密切相关，检测其表达情况对判断肿瘤的分化、临床进展以及估计预后有一定的参考价值。
[关键词]转移抑制基因；卵巢癌；免疫组化
, 百拇医药
[中图分类号]R737.31 [文献标识码]A [文章编号]1672-4208(2010)03-0001-03
卵巢癌的发生、发展具有多基因控制和多因素调节的复杂性，其中浸润、转移是肿瘤进一步发展的关键环节而肿瘤转移抑制基因表达减少、缺失、功能缺陷在此过程中起着至关重要的作用。笔者应用免疫组化法检测肿瘤转移抑制基因KA11在卵巢上皮性癌中的表达，探讨其在卵巢癌发生、发展过程中的作用。
1 材料与方法
1.1 标本来源 收集泰山医学院附属医院和泰安市中心医院病理科2002年12月～2007年12月存档蜡块，其中上皮性卵巢癌50例，年龄28～75岁，平均53.6岁。50例上皮性卵巢癌中，年龄≤50岁的14例，>50岁的36例；浆液性癌30例，粘液性癌12例，子宫内膜样癌8例；临床分期Ⅰ期11例，Ⅱ期9例，Ⅲ期20例，Ⅳ期10例；组织学分级G18例，G2 16例，G3 26例；无淋巴转移44例，有淋巴转移6例；无腹水者16例，有腹水者34例。患者术前均未接受放疗、化疗或免疫治疗，其临床分期和组织学分级均按FI-GO(1985年)和WHO分级标准。20例良性上皮性卵巢肿瘤(浆液性囊腺瘤10例，粘液性囊腺瘤10例)，取自同期行开腹或腹腔镜手术的患者，15例正常卵巢组织来自同期因子宫肌瘤而行手术治疗的患者。所有组织标本均经两位以上有经验的病理学医师确定病理诊断。
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1.2 主要试剂 兔抗人CD82多克隆抗体(BA1585)购自武汉博士德生物制品公司原液，稀释比例1：100；S-P免疫组化超敏试剂盒(SP-9001)购自北京中杉生物技术有限公司。
1.3 实验方法 KA11蛋白表达的检测应用免疫组织化学链真菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(Streptavidin-Peroxi-dase，SP)染色法。基本原理是采用生物素标记的第二抗体与链真菌抗生物素蛋白连接的过氧化物酶及基质素混合液来测定细胞和组织中的抗原。以PBS代替一抗作阴性对照，用已知的KA11阳性的前列腺良性增生组织作阳性对照。所有切片均与病理科医师采用双盲法阅片。
1.4 结果判定 肿瘤细胞膜和(或)细胞浆内棕黄色染色为阳性。参照Constantine等的标准略加修改。随机选取10个高倍镜视野，计数1000个细胞，观察阳性细胞所占的百分数及染色强度，综合染色强度和阳性细胞所占比例进行定量测定。阳性细胞所占比例评分标准：阳性细胞数<10%者0分；11%～40%者1分；41%～70%者2分；>70%者3分。染色强度评分标准：不着色0分；黄色1分；棕黄色2分；黄褐色3分。两者评分相加，0～1分为(-)；2分为(+)；3～4分为(++)；5～6分为(+++)。阳性细胞的判断标准：免疫组化的阳性表达均为各自染色条件下结构完整、定位明确、染色对比清晰棕黄色的细胞；DAB显色(棕黄色)。
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1.5 统计学处理 应用SPSS13.0统计软件包对实验数据进行统计处理，等级资料样本率的比较采用秩和检验，相关性分析采用X2检验。检验水准：双侧α=0.05。
2 结果
在正常卵巢组织中可见到KA11沿正常卵巢表面上皮呈连续均匀的细颗粒线状分布。50例卵巢上皮性癌标本中，临床早期KA11蛋白以细颗粒、线状连续分布在癌细胞的细胞膜。随着临床期别的增加染色逐渐弥漫性分布于细胞浆中，甚至还可出现在癌细胞紧邻的基质中。在晚期肿瘤组织中，KA11蛋白在胞膜和胞浆中的表达逐渐减少甚至缺失。KA11蛋白在卵巢癌组中的表达明显低于卵巢良性肿瘤组及正常卵巢组，差别均有统计学意义。在正常卵巢组织和卵巢良性肿瘤组织中的表达，差别无统计学意义(P>0.05)。KA11蛋白在上皮性卵巢癌组中的表达与临床分期、组织学分级、有无淋巴结转移及有无腹水密切相关(P<0.05)，而与年龄、病理类型无关(P>0.05)。E-cad蛋白在上皮性卵巢癌组中的表达与临床分期、组织学分级、有无淋巴结转移及有无腹水密切相关(P<0.05)，而与年龄、病理类型无关(P>0.05)。见表1。
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3 讨论
KA11/CD82基因，中文又称抗癌1号。首先是作为前列腺癌的特异性转移抑制基因由Dong等发现。近年来的大量研究中显示多种恶性肿瘤的发生和转移均伴有KA11基因表达的下降或缺失，己见报道的有肺癌、胰腺癌、乳腺癌、结肠癌、黑色素瘤、膀胱癌、宫颈癌。KA11作为新的肿瘤转移抑制基因，在肿瘤的浸润、转移中的作用越来越受到学者的广泛关注。
上皮性卵巢癌发病机制不明，恶性程度较高，死亡率高居妇科肿瘤之首。因其深居盆腔，没有特异的早期症状和体征，临床发现时多已届晚期，60%～70%的患者就诊时已发生盆腔后腹膜或腹膜后淋巴转移，致使其5年存活率始终在20%～30%左右。发现新的肿瘤标志物，早期有效的检测卵巢肿瘤，及时阻断肿瘤转移，同时又可以准确判断预后是卵巢癌防治的重要研究课题。KA11蛋白分子属于跨膜4超家族(Trasmembane 4 super-family，TM4SF)。广泛的上皮细胞定位和糖基化提示KA11可能介导细胞与细胞间、细胞与细胞外基质间的相互作用，并在肿瘤的浸润和转移起重要的作用。机体大多数组织均有表达，其中前列腺、肺、肝、膀胱、骨髓、胎盘等组织丰度较高，乳腺、胰腺、骨骼肌和胸腺丰度中等，而在脑、心脏、卵巢、胃肠道组织中表达次之。
White等用Western印迹分析卵巢癌细胞株中KA11蛋白的表达提示KA11可能在人类卵巢癌恶变过程中起重要作用，KA11下调和卵巢上皮癌恶性进展有关。Schindl, http://www.100md.com(张毅芳 林国志)