[摘要] 目的 以慢病毒介導人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因转染体外培养的人髓核细胞，建立永生化髓核细胞系，为后期转基因与动物实验提供种子细胞。方法 利用机械与酶消化的方法获得正常的人椎间盘髓核细胞，将构建好的重组慢病毒-hTERT(pLVX-hTERT)转染第2代体外单层培养的髓核细胞。用重组慢病毒-增强型绿色荧光蛋白作为标记物，在荧光电镜下观察细胞转染效率，按感染复数(MOI)40、60、80、100设组，选择出病毒转染的最佳MOI;设立pLVX-hTERT转染组、空病毒转染对照组及空白细胞对照组。在倒置显微镜下观察髓核细胞的形态，用反转录聚合酶链反应、细胞免疫荧光技术检测转染后hTERT基因在髓核细胞内的表达情况，用反转录聚合酶链反应检测髓核细胞Ⅱ型胶原及蛋白多糖的表达情况。结果 慢病毒转染细胞后第6天，MOI为100时转染效率最高，可达82.9%。pLVX-hTERT转染组在转染后第7、15、30、60、90天均可检测到hTERT基因的表达 ......