活性碳对乌头类生物碱的吸附作用
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【中图分类号】R914.1【文献标识码】D【文章编号】1672-5085(2008)02-0054-02
【摘要】目的：探讨活性碳对乌头类生物碱的吸附作用。方法：本研究采用酸性染料比色法，测定了川乌草乌药液及经不同浓度的活性碳吸附后川乌草乌药液中乌头碱类生物碱的含量。结果：活性碳对乌头碱类生物碱有较强的吸附作用。结论：对含乌头碱类生物碱成分的制剂工艺，应尽量避免使用活性碳。
【关键词】活性碳；乌头类生物碱；吸附作用
Activated carbon to monkshood class alkaloid adsorption Huang Qiuping
【Abstract】Objective:Discussion activated carbon to monkshood class alkaloid adsorption. Method: This research uses the acid dyes color method, has determined the Sichuan polygonum grass daphnidium myrrha fluid and after the different density activated carbon adsorption in the Sichuan polygonum grass daphnidium myrrha fluid the monkshood alkali genus alkaloid content.Result：The activated carbon has the stronger adsorption to the monkshood alkali genus alkaloid. Conclusion: To contains the monkshood alkali genus alkaloid ingredient the preparation craft, should avoid using the activated carbon as far as possible.
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【Key words】Activated carbon; Monkshood class alkaloid; Adsorption
川乌、草乌药材中主要含乌头碱、中乌头碱、次乌头碱等。川乌、草乌及其炮制品均为中国药典2005年版一部收载的常用中药。中医认为这些药具有祛风除湿、温经止痛的作用。现代药理研究证明，乌头类中药具有镇静、镇痛、强心、抗炎、抗肿瘤等作用。由于其主要有效成分为剧毒的双酯型生物碱，而且治疗量与中毒量接近。活性碳作为一种有效的吸附剂，本研究将活性碳用于吸附川乌、草乌药材中的乌头类生物碱。现将研究将结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 实验材料：
UV2260(日本岛津)；瑞士梅特勒AG2245型电子分析天平；容量仪器均经较正。乌头碱标准品(由中国药品生物制品检定所提供)；川乌草乌药材(购于承德药材公司)；所用试剂均为分析纯。
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溴甲酚绿染料溶液的配制：取27.16g醋酸钠(NaAc•3H2O)，加入900ml水使溶解，用冰醋酸调节pH至5.4±0.1，加水至1000ml，备用。取溴甲酚绿约100mg，用0.05mol/L氢氧化钠3.5ml置超声波仪中10min溶解后，再加入pH5.4±0.1的醋酸2醋酸钠缓冲液至200ml，过滤，取滤液备用。
1.2 实验方法。
1.2.1 对照品溶液的制备：取乌头碱对照品约4mg，精密称定，置50ml量瓶中，加pH值3.0±0.1HAC-NaAc缓冲液至刻度，作为对照品液，备用。
1.2.2 最大吸收峰的确定：用下述条件对供试品液及对照品液与溴甲酚绿形成的离子对的氯仿溶液，在紫外分光光度计上从340～520nm的范围内扫描，其最大吸收峰位在415nm，与文献报道[1～2]相同。
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1.2.3 标准曲线的制备(酸性染料比色法)：
精密吸取乌头碱对照品液0.5，1，2，3，4，5ml分别置不同的分液漏斗中，加pH值为3.0的HAC-NaAC缓冲液至10ml，取氯仿10ml置另一分液漏斗中作为空白对照。在以上7个分液漏斗中均加入10ml pH为5.4的溴甲酚绿染料溶液，充分振摇，静置10min，用氯仿液提取3次(10，5，5)，氯仿层过滤于25ml量瓶中，并用氯仿液稀释至刻度，在415nm处测定吸收度，求得回归方程。
2 结果
2.1 标准曲线测定结果：乌头碱含量在1.85～18.52μg/ml范围内，其吸收度与乌头碱浓度呈良好的线性关系。具体结果如表1所示。
2.2 活性碳吸附前、后乌头碱类生物碱含量测定：
取川乌草乌药材中粉约1.40g，按照每份0.20g，精密称定分装成7份，各份置三角瓶中，精密加入pH值3.0的HAC-NaAC缓冲液100ml，浸泡过夜，用干燥滤纸滤过，取滤液50ml，向各份样品中分别加入0.0g/L、0.1g/L、0.2g/L、0.4g/L、0.6g/L、0.8g/L、1.0g/L量的活性碳，100℃加热15min，过滤， 滤液浓缩至10mL，按标准曲线制备，自“加入10ml pH5.4的溴甲酚绿染料”起操作，在415nm测定吸收度，并从标准曲线上求得供试品中总乌头碱相当于乌头碱的量，再计算含量。具体结果可见表2。
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3 讨论
乌头中剧毒成分为双酯二萜类生物碱，主要为乌头碱(aconitine，Ac)、中乌头碱(mesaconitine，MA)与次乌头碱(hypaconitine，HA)。口服双酯类生物碱3～4mg即可致人死亡(急性毒性研究的LD50为1.8mg/kg)，说明双酯类生物碱毒性极强，其是临床应用受限的主要原因。有研究证明，乌头、附子在炮制过程中酯键水解，先失去乙酰基生成单酯二萜类生物碱(如苯甲酰乌头碱)，再继续水解失去苯甲酰基生成乌头原碱(aconine)。水解后产物毒性显著下降，苯甲酰乌头碱毒性约为乌头碱的1/200，而乌头原碱毒性仅为乌头碱的1/2000[3]。乌头碱毒性主要是对神经和心血管系统造成严重伤害。乌头碱首先兴奋—麻痹感觉神经和中枢神经，其次是兴奋胆碱能神经和呼吸中枢而出现一系列胆碱能神经M 样和N 样症状，最后则由于呼吸麻痹和中枢抑制而导致机体死亡；心脏的毒性是其对钠通道的激动作用，严重的心律失常、室颤以及猝死是乌头碱导致心肌兴奋性增高、促进膜去极化而产生异位节律的结果。
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本研究采用酸性染料比色法，测定了川乌草乌药液及经不同浓度的活性碳吸附后川乌草乌药液中乌头碱类生物碱的含量。结果显示：活性碳对乌头碱类生物碱有较强的吸附作用。
酸性染料比色法原理：生物碱与酸性染料形成离子缔合物，经提取后进行比色测定，有利于排除干扰和提高灵敏度。在操作过程中，所有试剂、溶剂的量、溶液的pH 值、反应时间、温度等对反应条件有较大影响， 均须严格控制；而且，本法操作时容量器具必需干燥，否则影响测定结果。酸性染料比色法特点：操作简单，方法准确，人为操作误差较小，可作为川乌草乌的定量测定方法。
活性碳吸附原理及特性：活性碳是依据吸附原理去除水中有机物的。首要条件是碳在吸附过程中有较大的表面积。典型的粒状活性碳具有500～1900 cm2/g的表面积。活性碳优先吸附有机物，它在吸附有机物的过程中，物理吸附与化学吸附是同时进行的。因此，对含乌头碱类生物碱成分的制剂工艺，应尽量避免使用活性碳。
参考文献
1 中华人民共和国卫生部药品标准，中成药方制剂，第一册[S].WS3-B-0046-89，46
2 乌兰娜日.酸性染料比色法测定附子理中丸总乌头生物碱的含量[J].现代应用药学，1996，13(4):30
3 邓有鹃、吕怀莺.从中药有效成分看特殊药传统煎法[J].浙江中西医结合杂志，2001，11(6)：387, 百拇医药(黄秋萍)