HPLC测定牛黄丸中黄芩苷的含量
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摘要：目的建立HPLC法测定牛黄丸中黄芩苷的含量。方法采用Kromasasil C18 柱(150 mm×4.6 mm)，以甲醇-水-磷酸(47:53:0.2)为流动相，紫外检测波长为280 nm。结果黄芩苷在0.17~1.12μg范围内呈良好的线性关系(r＝0.999 9)，黄芩苷平均回收率为98.3%(n＝6)，RSD分别为1.37%。结论此方法准确、可靠、重现性好，可适用于牛黄丸中黄芩苷含量的测定。
关键词：牛黄丸；黄芩苷；高压液相色谱法；含量测定
中图分类号：R282.74文献标识码：A文章编号：1672-979X(2007)09-0027-03
牛黄丸由牛黄、黄连、黄芩、麝香、冰片等药物组成，具有清热解毒、镇惊开窍之效。临床用于热病，邪入心包，高热惊厥，神昏谵语等症。原标准未测定药材成分含量。为了提高原标准以更好地控制成品质量，我们参照药典的色谱条件[1]，对测定黄芩中黄芩苷的含量进行了研究，现报道如下。
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1仪器与试药
Waters 2695高效液相色谱仪，Waters 2996二极管阵列检测器，Empower色谱工作站(美国Waters公司)；十万分之一电子天平(德国Sartorius公司)；HS10260D型超声波清洗器(天津恒奥科技发展有限公司)；黄芩苷对照品(批号：110715-200512，中国药品生物制品检定所提供)；牛黄丸 (香港马百良药厂提供)；甲醇为色谱纯；双蒸水。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：Kromail C18(3.0 mm×250 mm，5 μm)；柱温：常温； 流动相：甲醇-水-磷酸(47:53:0.2)；流速：1.0 mL/min；检测波长：280 nm。
2.2对照品溶液的制备
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精密称取黄芩苷对照品适量，加70%甲醇制成每1 mL含55μg的溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备
取剪碎的本品约0.8 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇100 mL，密塞，称定重量，浸渍过夜，超声处理(功率260W，频率40 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失重量，摇匀，取续滤液作供试品溶液。同法制备不含黄芩的阴性溶液。专属性实验色谱图见图1~3。
2.4线性范围试验
分别精密吸取黄芩苷对照品溶液(55.9μg/mL)3μL，5μL，8μL，10μL，12μL，15μL，20μL，注入液相色谱仪，以峰面积值为纵坐标，黄芩苷的量为横坐标进行回归分析，回归方程为：Y =3.0×106 X+50.589，r＝0.999 9。表明黄芩苷在0.17~1.12μg 范围内呈良好的线性关系
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2.5稳定性试验
取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8 h各测定1 次，黄芩苷测定结果的RSD为0.31%，表明供试品溶液在8 h内稳定。
2.6精密度试验
精密吸取对照品溶液10μL，重复进样5 次，测定黄芩苷结果的RSD为0.28%。
2.7加样回收率试验
精密称取已知含量的供试品(批号060802，黄芩苷含量为6.92 mg/g)6份，每份约0.4 g，再分别精密加入浓度为0.618 mg/mL的黄芩苷对照品溶液5 mL，同上处理并测定黄芩苷的含量，结果见表1。平均回收率为98.3 %，RSD为1.37% 。
2.8重复性试验
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取同一批样品，依法制备6份供试品溶液，测定黄芩苷的平均含量为6.92 mg/g， RSD为1.18%。
2.9样品测定
按2.3项处理样品并测定含量，3批样品中黄芩苷的含量分别为6.95 mg/g，6.93 mg/g，6.96 mg/g(n=3)。故暂定每1g牛黄丸中含黄芩苷应不低于5.0 mg。
3讨论
3.1提取方法的选择根据文献[2，3]的方法处理供试品溶液，结果表明，回流与超声提取两种方法均能将黄芩苷提取完全，但回流提取的样品杂质峰较多、对黄芩苷测定有干扰，且操作繁琐。因此，我们采用浸渍超声法制备供试品溶液。
3.2提取时间的确定经试验超声处理样品20，30，40 min，结果表明，超声处理30 min即可将样品提取完全。
参考文献
[1]国家药典委员会. 中国药典(2005版一部)[S]. 北京：化学工业出版社，2005：211.
[2]熊春媚，郭亚东，马银海，等. RP- HPLC法测定黄芩苷和黄芩素的含量[J]. 食品与药品，2007，9(3)：15 -17
[3]王厚伟，高德民，田景振. 高效液相色谱法测定复方黄芩消炎片中黄芩苷的含量[J]. 中国实验方剂学杂志，2007，13(4)：13-15, 百拇医药(叶曼红 石 晓)