胰激肽原酶生产工艺的改进
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摘要：目的提高胰激肽原酶的纯度。方法通过监测不同时间点洗脱液中胰激肽原酶的比活，确定洗脱液的收集范围。用冷冻干燥方法代替传统的丙酮沉淀、真空干燥法。结果胰激肽原酶比活达到每1mg蛋白质300 U以上(供口服用)和每1mg蛋白质600 U以上(供注射用)。结论新工艺简便易行。
关键词：胰激肽原酶；生产工艺；冷冻干燥
中图分类号：TQ460.6文献标识码：A文章编号：1672-979X(2008)03-0033-02
Improvement of Production Technology for Pancreatic Kininogenase
WANG Li-e, MA Chun-hua, YIN Xin, JIANG Yu-hong
(Jinan Welcome Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd., Jinan 250100, China)
, http://www.100md.com
Abstract：Objective To improve the purity of pancreatic kininogenase. Methods The specific activity of pancreatic kininogenase in the eluant was monitored at different time to determine the scope of collection of the eluant. The freeze-drying method took the place of the traditional acetone precipitation and v1acuum drying method. Results The specific activity of pancreatic kininogenase reached up to 300 U/mg protein (for oral) and 600 U/mg protein (for injection). Conclusion The new technology is easy to operate.
, 百拇医药
Key words：pancreatic kininogenase; production technology; freeze drying
胰激肽原酶是从猪胰脏中提取的一种蛋白质水解酶，具有扩张血管，增加血流量，改善微循环，抑制血小板黏附、聚集等功能，并可抑制血栓形成，促进血栓溶解[1]。
国家食品药品监督管理局规定，胰激肽原酶新的质量标准(WS1-XG- 003-2006)[2]于2006年6月5日实施，原标准(载1998年卫生部标准二部第六册)停止使用。新标准规定：每1 mg蛋白质含胰激肽原酶的效价(比活)应达到300 U以上(供口服用)和600 U以上(供注射用)(原标准规定每1 mg蛋白质的效价不得少于300 U)。为达到新的质量标准，我们摸索改进了胰激肽原酶的生产工艺，并用冷冻干燥技术取代了原来的丙酮沉淀、真空干燥法，取得了较好的效果。
1材料
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胰激肽原酶粗品溶液(酶活性23 000~25 000 U/mL，济南维尔康生化制药有限公司)；亲和基团凝胶树脂；其他试剂为分析纯。
层析柱(100 mm×300 mm，定做)；TU-1901双光束紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)；ZLG-4型真空冷冻干燥机(上海众天科技有限公司)。
2方法
2.1胰激肽原酶粗品溶液的精制
选用亲和基团凝胶树脂层析柱，用20 %硫酸铵溶液平衡；将胰激肽原酶粗品溶液上柱吸附，控制流速2.5～3.0 mL/min；用20 %饱和硫酸铵溶液洗涤；用15 %氯化钠洗脱，控制流速4.0～4.5 mL/min洗脱10 h。分段收集洗脱液，跟踪监测不同时间每1 mg蛋白质含胰激肽原酶的效价。将收集的可供口服和注射用的洗脱液，分别浓缩至收集体积的30 %左右，加入稳定剂，冷冻干燥。
, 百拇医药
2.2洗脱液的跟踪监测
洗脱过程中，在1.0，1.5，2.0……9.0 h时，取样检测1 mg蛋白质含胰激肽原酶的效价，结果见表1。
注：按表中左到右的顺序，5批胰激肽原酶粗品溶液的酶活性分别为：22 100，22 134，22 135，22 147，22 240U/mL。
实验结果表明，洗脱过程中，4.0～6.0 h时各监测点每1 mg蛋白质含胰激肽原酶的效价较高，达到了供注射用的要求，可合并4.0至6.0 h之间各段收集的洗脱液，用于生产供注射用的胰激肽原酶；1.5～4.0 h，6.0～8.5 h时，各监测点每1 mg蛋白质含胰激肽原酶的效价较低且差异较大，合并各分段收集的洗脱液，可用于生产供口服用的胰激肽原酶。
2.3冷冻干燥
将浓缩后的洗脱液加入稳定剂，冷冻干燥。冷冻干燥包括3个阶段：预冻、低温升华和高温干燥阶段。只有选择合适的冻干工艺，才能在较低的生产成本条件下制出优质的产品。冻干曲线如下。
, 百拇医药
2.4成品检验结果见表2。
表2数据表明，按上述生产工艺生产，成品的酶活性、比活和干燥失重均符合标准要求。
3讨论
(1)胰激肽原酶的制备方法和质量控制有近期发表的综述[3]，与本文的改进原则一致；(2)本文介绍改进的工艺在收集洗脱液时定点监测，分段收集，产品分别供口服和注射用，工艺灵活，操作简便；(3)用亲和凝胶树脂处理胰激肽原酶，其专一性强，产品纯度较高；(4)用冻干技术替代丙酮沉淀、真空干燥，可以避免有机溶液沉淀时酶活性流失，提高了收率，降低了成本，还避免了有机溶剂残留问题。
参考文献
[1]于波，孙丽娟，于晓波. 胰激肽原酶对老年冠心病患者血液流变性的影响[J]. 中国血液流变学杂志. 2005，15(2)：265-268.
[2]国家食品药品监督管理局. WS1-XG-003-2006 胰激肽原酶[S].
[3]路宁，姜玉红. 胰激肽原酶的制备方法和质量控制[J]. 食品与药品，2007，9(8)：25-27., 百拇医药(王丽娥 马春华 殷 馨 姜玉红)