气相色谱法测定伤科接骨片中冰片的含量
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摘 要：目的建立测定伤科接骨片中冰片含量的方法。方法采用气相色谱法，DB—WAX弹性毛细管色谱柱(30m×0.32mmX 1.0μm)，氢火焰离子化检测器(FID)，恒温测定。结果冰片的主要成分及内标物均完全分离，在考察浓度范围内线性关系良好(r=0.999)，回收率符合规定。结论该方法准确、灵敏度高，可作为测定伤科接骨片中冰片含量的方法。
关键词：伤科接骨片；顶空气相色谱法；冰片；含量
中图分类号：R979.4 文献标识码：A 文章编号：1672-979X(2010)11-0428-03
伤科接骨片是骨科临床上常用的中成药，主要由三七、红花、冰片、乳香等中药组成Ⅲ。冰片为主要的药效成分之一，具有清热止痛、祛瘀活血的功效。为有效控制产品质量，我们首次建立了气相色谱法测定伤科接骨片中冰片的含量。该方法准确、简单、灵敏度高，可作为伤科接骨片的质控内容列入质量标准。
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1 仪器及试药
1.1 仪器
GC-2010气相色谱仪(岛津)；DB-WAX毛细管色谱柱(30m×0.32mm×1.0μm)。
1.2 试药及试剂
冰片对照品(中国药品生物制品检定所)；伤科接骨片(大连美罗)；水杨酸甲酯、乙酸乙酯(国药试剂，分析纯)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
气化室温度200℃：FID检测器温度250℃：载气为氮气；柱流量2.0 mL/min；柱温150℃，保持11min，进样体积2μL。理论塔板数按内标物水杨酸甲酯计不低于5000。对照品中主成分(异龙脑和龙脑)与内标物水杨酸甲酯均得到基线分离，色谱图见图1。
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2.2 内标溶液和对照溶液的制备
称取内标物水杨酸甲酯25mg，精密称定，置入100mL量瓶中，加乙酸乙酯溶解并定容，摇匀，作为内标溶液。
1.屏龙脑；2.龙脑；3.内标物(水杨酸甲酯)图1冰片对照品溶液(A)和供试品溶液(B)色谱图
称取冰片对照品50.8mg，精密称定，置入100mL量瓶中，加乙酸乙酯溶解并定容，摇匀，再精密量取此溶液5.mL置入50mL量瓶中，加乙酸乙酯溶解并定容，摇匀，作为对照品贮备溶液。精密量取对照品贮备溶液5.0mL，置入10mL量瓶中，精密加入内标溶液1.0mL，加乙酸乙酯溶解并定容，摇匀，作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取本品10片，研细，称取0.4g，精密称定，置入10mL量瓶中，加乙酸乙酯适量溶解，超声30min，放冷，精密加入内标溶液1.0mL，加乙酸乙酯定容，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。
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2.4 线性关系考察
精密量取对照品溶液贮备液2.5，4.0，5.0，6.0，7.5mL分别置10mL量瓶中，精密加入1.0mL内标溶液，加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，依法测定。以对照品溶液的浓度c(μg/mL)为横坐标，以其峰面积与内标物峰面积的比值(Axc/Aμ)为纵坐标线性回归。结果对照品溶液浓度在12.7～38.1μg/mL范围内线性关系良好，线性方程为Y=0.1089 X-0.0232(r=0.999)。
2.5 精密度
精密量取对照品溶液2μL，连续进样6次，记录对照品与内标物的峰面积，其比值的相对标准偏差RSD=0.55%，表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性
精密量取对照品溶液和供试品溶液，分别在0.2，4，6，8h进样分析，记录对照品与内标物的峰面积，供试品与内标物的峰面积。其比值的相对标准偏差RSD分别为0.92%和0.78%，表明对照品溶液和供试品溶液在8h内稳定。
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2.7 重复性
按照对照品溶液和供试品溶液制备方法，分别制备l份对照品溶液和6份供试品溶液，进样分析，记录对照品与内标物的峰面积，计算每份供试品溶液中冰片的含量。其相对标准偏差RSD=0.64%，表明该测定方法的重复性良好。
2.8 回收率
取同一批样品，称取0.2g，精密称定，共取9份，置入10mL量瓶中，分3组，分别加入对照品贮备溶液2.0，2.5，3.0mL，加适量乙酸乙酯溶解，超声30min，放冷，精密加入内标溶液1.0 mL，乙酸乙酯定容，摇匀。另配制对照品溶液和供试品溶液各1份，依法分析，用内标法计算9个供试品溶液的回收率。结果见表1。
2.9 样品测定
取本品3批(20090501，20090601，20090701)，按照2.2项的方法制备供试品溶液测定，计算冰片含量。结果3批样品中冰片含量分别为0.058%，0.061%和0.062%(n=2)。
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3 讨论
3.1 色谱条件的优化
通过对不同色谱柱、载气流量和柱温的考察，结合系统适用性的要求，最终确定最佳的色谱条件，使对照品中主成分、内标及溶剂的分离度达到要求。
3.2 溶剂和内标物的选择
乙酸乙酯对冰片具有较好的溶解性，并且样品中其他干扰成分的溶出较少，故选择其作为溶剂。水杨酸甲酯在该色谱条件下色谱峰稳定，峰形好，保留时间适中，不干扰对照品色谱峰，故选其作为内标。
我们首次建立了检测气相色谱法伤科接骨片中冰片的含量，方法验证证明该方法准确、灵敏度高，在考察的浓度范围内线性关系良好(r=0.999)，回收率符合规定，可作为伤科接骨片中冰片含量的质量控制方法。
参考文献
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