HPLC法测定脑血栓片中芍药苷的含量
[摘要] 目的：建立脑血栓片中芍药苷的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法测定，色谱柱为DiamonsilTM C18(4.6 mm×250 mm， 5 μm)；流动相为乙腈-1%磷酸溶液(15∶85)；检测波长为230 nm；柱温为25℃；流速为1.0 ml/min；理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于3 000。结果：芍药苷在0.100 2~1.002 0 μg范围内线性关系良好，r=0.999 99。芍药苷平均回收率为98.98%，RSD为0.24%。结论：该方法准确性、重复性好，可用于脑血栓片的质量控制。
[关键词] 脑血栓片；芍药苷；HPLC法；含量测定
[中图分类号]R917 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2008)04(b)-037-02
Content determination of paeoniflorin in Naoxueshuan Tablets by HPLC
, 百拇医药
WANG Shu
(Dandong Institute for Drug Control, Dandong 118002, China)
[Abstract] Objective: To establish the quantitative method of paeoniflorin in Naoxueshuan Tablets by HPLC. Methods: The column was DiamonsilTM C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm); the mobile phase was acetonitrile-1% phosphoric acid (15∶85) mixture; the detective wavelength was set at 230 nm;the flow rate was 1.0 ml/min; the column temperature was 25℃;the theoretical plates of paeoniflorin peak was greater than 3 000. Results:The linear range was 0.100 2~1.002 0 μg, r=0.999 99. The average recovery of paeoniflorin was 98.99% withRSD of 0.26%. Conclusion:This method is accurate, reproductivity and it can be used for the quality control of Naoxueshuan Tablets.
, http://www.100md.com
[Key words] HPLC; Naoxueshuan Tablets; Paeoniflorin; Content determination
脑血栓片为治疗脑血栓的中药制剂，收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第19册[1]，是由红花、当归、水蛭、赤芍、桃仁、丹参、川芎、土鳖虫、羚羊角、牛黄等10味药经加工制成的片剂。具有活血化瘀、醒脑通络、潜阳熄风的功效。方中赤芍为臣药，其主要成分为芍药苷。标准中无定量指标，不能有效控制其质量。笔者参考《中国药典》2005年版一部胃康灵胶囊的质量控制方法，采用HPLC法测定脑血栓片中芍药苷的含量，以探讨脑血栓片的质量控制方法。
1仪器与试药
1.1仪器
LC-10AVP高效液相色谱仪(日本Shimadzu公司)；Anastar工作站；SPD-10ATVP检测器；CSF-1A超声波发生器(上海超声波仪器厂)。
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1.2试药
芍药苷对照品(购自中国药品生物制品检定所，批号110736-200321，供含量测定用)；脑血栓片(丹东市康辰药业有限公司提供，批号：20050501、20050502、20050503)；乙腈为色谱纯；水为二次蒸馏水；其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：DiamonsilTMC18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈-1%磷酸溶液(15∶85)；检测波长：230 nm；柱温25℃；流速：1.0 ml/min；进样量：10 μl。理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于3 000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取减压干燥至恒重的芍药苷对照品10.02 mg，置于100 ml容量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密吸取此液5 ml，置10 ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，即得每1ml含芍药苷50.10 μg的对照品溶液。
, 百拇医药
2.3 供试品溶液的制备
取本品10片，除去包衣，精密称定，研匀，精密称定约0.2 g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25 ml，称定重量，超声处理(功率250 W，频率20 kHz)30 min，取出，放冷，再称定重量，加稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4专属性考察
按处方比例配制不含赤芍药材的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液并测定，结果阴性对照溶液在芍药苷对照品吸收峰位置处无干扰。
2.5 线性关系考察
精密吸取对照品储备液1.0，2.5，5.0，7.5，10.0 ml，分别置于10 ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀。分别吸取各浓度溶液10 μl注入液相色谱仪中，测定峰面积，以芍药苷进样量X(μg)为横坐标，峰面积Y为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为：Y＝25 324.51X-14 386.19，r=0.999 99，表明芍药苷进样量在0.100 2~1.002 0 μg呈良好的线性关系。
, 百拇医药
2.6 精密度试验
分别精密吸取50.10 μg/ml的芍药苷对照品溶液10 μl，连续进样5次，测定峰面积，对照品平均峰面积为773 760，RSD＝0.76%。
2.7稳定性试验
取同一份样品溶液分别放置2，4，8，12，16，20，24 h，测定供试品中芍药苷的峰面积，测得其峰面积的平均值为885 652，结果RSD＝1.25%，表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.8 重现性试验
取同一批号的供试品适量，精密称定6份，按“2.3”项下的方法操作，制备供试品溶液，测定供试品中芍药苷的含量，结果平均含量为3.34 mg/片，RSD＝1.05 %。
2.9 回收率试验
, 百拇医药
取已知含量的样品(批号：20050501)约0.1 g，精密称定，共6份。分别精密加入芍药苷对照品溶液(30.06 μg/ml)25 ml，按“2.3”项下方法操作，制备供试品溶液，测定脑血栓片中芍药苷的含量，计算回收率，平均回收率为98.98%，RSD为0.24%。
2.10 样品含量测定
按本质量标准含量测定项下方法操作，制备供试品溶液，测定三批脑血栓片中芍药苷的含量，测定结果分别为3.34，3.18，3.43 mg/片。
3 讨论
关于流动相的筛选与确立，曾采用乙腈-水(14∶86)，乙腈-水-冰醋酸(15∶85∶1.5)等流动相，分离结果不理想，后采用乙腈-1%磷酸溶液(15∶85)为流动相，供试品中芍药苷与相邻组分分离度良好，故确立其为流动相。
[参考文献]
[1]中华人民共和国国家药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂[S].第19册. 1998.
[2]中华人民共和国国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2005.6.
(收稿日期：2008-01-17), http://www.100md.com(王 姝)
[关键词] 脑血栓片；芍药苷；HPLC法；含量测定
[中图分类号]R917 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2008)04(b)-037-02
Content determination of paeoniflorin in Naoxueshuan Tablets by HPLC
, 百拇医药
WANG Shu
(Dandong Institute for Drug Control, Dandong 118002, China)
[Abstract] Objective: To establish the quantitative method of paeoniflorin in Naoxueshuan Tablets by HPLC. Methods: The column was DiamonsilTM C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm); the mobile phase was acetonitrile-1% phosphoric acid (15∶85) mixture; the detective wavelength was set at 230 nm;the flow rate was 1.0 ml/min; the column temperature was 25℃;the theoretical plates of paeoniflorin peak was greater than 3 000. Results:The linear range was 0.100 2~1.002 0 μg, r=0.999 99. The average recovery of paeoniflorin was 98.99% withRSD of 0.26%. Conclusion:This method is accurate, reproductivity and it can be used for the quality control of Naoxueshuan Tablets.
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[Key words] HPLC; Naoxueshuan Tablets; Paeoniflorin; Content determination
脑血栓片为治疗脑血栓的中药制剂，收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第19册[1]，是由红花、当归、水蛭、赤芍、桃仁、丹参、川芎、土鳖虫、羚羊角、牛黄等10味药经加工制成的片剂。具有活血化瘀、醒脑通络、潜阳熄风的功效。方中赤芍为臣药，其主要成分为芍药苷。标准中无定量指标，不能有效控制其质量。笔者参考《中国药典》2005年版一部胃康灵胶囊的质量控制方法，采用HPLC法测定脑血栓片中芍药苷的含量，以探讨脑血栓片的质量控制方法。
1仪器与试药
1.1仪器
LC-10AVP高效液相色谱仪(日本Shimadzu公司)；Anastar工作站；SPD-10ATVP检测器；CSF-1A超声波发生器(上海超声波仪器厂)。
, http://www.100md.com
1.2试药
芍药苷对照品(购自中国药品生物制品检定所，批号110736-200321，供含量测定用)；脑血栓片(丹东市康辰药业有限公司提供，批号：20050501、20050502、20050503)；乙腈为色谱纯；水为二次蒸馏水；其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：DiamonsilTMC18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈-1%磷酸溶液(15∶85)；检测波长：230 nm；柱温25℃；流速：1.0 ml/min；进样量：10 μl。理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于3 000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取减压干燥至恒重的芍药苷对照品10.02 mg，置于100 ml容量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密吸取此液5 ml，置10 ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，即得每1ml含芍药苷50.10 μg的对照品溶液。
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2.3 供试品溶液的制备
取本品10片，除去包衣，精密称定，研匀，精密称定约0.2 g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25 ml，称定重量，超声处理(功率250 W，频率20 kHz)30 min，取出，放冷，再称定重量，加稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4专属性考察
按处方比例配制不含赤芍药材的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液并测定，结果阴性对照溶液在芍药苷对照品吸收峰位置处无干扰。
2.5 线性关系考察
精密吸取对照品储备液1.0，2.5，5.0，7.5，10.0 ml，分别置于10 ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀。分别吸取各浓度溶液10 μl注入液相色谱仪中，测定峰面积，以芍药苷进样量X(μg)为横坐标，峰面积Y为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为：Y＝25 324.51X-14 386.19，r=0.999 99，表明芍药苷进样量在0.100 2~1.002 0 μg呈良好的线性关系。
, 百拇医药
2.6 精密度试验
分别精密吸取50.10 μg/ml的芍药苷对照品溶液10 μl，连续进样5次，测定峰面积，对照品平均峰面积为773 760，RSD＝0.76%。
2.7稳定性试验
取同一份样品溶液分别放置2，4，8，12，16，20，24 h，测定供试品中芍药苷的峰面积，测得其峰面积的平均值为885 652，结果RSD＝1.25%，表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.8 重现性试验
取同一批号的供试品适量，精密称定6份，按“2.3”项下的方法操作，制备供试品溶液，测定供试品中芍药苷的含量，结果平均含量为3.34 mg/片，RSD＝1.05 %。
2.9 回收率试验
, 百拇医药
取已知含量的样品(批号：20050501)约0.1 g，精密称定，共6份。分别精密加入芍药苷对照品溶液(30.06 μg/ml)25 ml，按“2.3”项下方法操作，制备供试品溶液，测定脑血栓片中芍药苷的含量，计算回收率，平均回收率为98.98%，RSD为0.24%。
2.10 样品含量测定
按本质量标准含量测定项下方法操作，制备供试品溶液，测定三批脑血栓片中芍药苷的含量，测定结果分别为3.34，3.18，3.43 mg/片。
3 讨论
关于流动相的筛选与确立，曾采用乙腈-水(14∶86)，乙腈-水-冰醋酸(15∶85∶1.5)等流动相，分离结果不理想，后采用乙腈-1%磷酸溶液(15∶85)为流动相，供试品中芍药苷与相邻组分分离度良好，故确立其为流动相。
[参考文献]
[1]中华人民共和国国家药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂[S].第19册. 1998.
[2]中华人民共和国国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2005.6.
(收稿日期：2008-01-17), http://www.100md.com(王 姝)