抗人β2微球蛋白单克隆抗体的制备及鉴定(2)
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1.8 抗体亲和常数的测定
参照Beatty的方法[6~7] ，即选用间接ELISA的方法测定，将抗原分别以50、25、12.5、6.25 μg/L包被，加入倍比稀释的抗体，再加入HRP标记羊抗鼠IgG抗体，TMB显色测OD450值。以抗体浓度的对数为横坐标，以OD450值为纵坐标，每种抗体得出4条反应曲线，以每条曲线上部平坦段的OD450值作为100%，在曲线上查出50%OD450值相对应的抗体浓度，按Beatty推导公式：
Kaff=(n-1)/2(n[Ab′]t-[Ab]t)计算亲和常数。
2 结果
2.1 杂交瘤细胞株的建立
采用上述免疫和融合方法，进行了细胞融合，共筛选出10株杂交瘤细胞。经3次亚克隆后，100%的检测孔保持了分泌抗人β2-MG抗体的能力。
2.2 单克隆抗体的效价
利用间接ELISA试验对这些单克隆抗体的效价进行了测定。结果见表1。
表1β2-MG单抗效价(万)
2.3 抗体亚类
10株杂交瘤细胞株，其分泌的McAb Ig亚类结果见表2。
表2杂交瘤细胞株分泌的McAb Ig亚类
2 ......
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