叶绿酸铜钠对结直肠肿瘤抑制作用的实验研究(2)
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1.2 免疫组化染色
常规石蜡包埋，切成厚5 μm切片，每隔50 μm取1片，行免疫组织化学染色(SABC法) ，检测PCNA、P21、caspase-3蛋白表达水平。滴加1∶200的一抗，4°C冰箱过夜。滴加生物素化二抗，室温20 min。滴加试剂SABC，室温20 min。DAB显色，苏木素轻度复染。PCNA，P21表达用肠肿瘤组织作阳性对照，caspase-3表达用试剂中所附阳性切片为阳性对照，同时用0.01 mol/L PBS替代一抗作为阴性对照。
1.3 统计学方法
实验数据用SPSS11.5统计学软件包处理：大肠肿瘤发生率、肠癌发生率用Fisher精确概率法，肠癌百分率和肿瘤分布部位用卡方检验，小鼠平均荷瘤数用方差齐性t检验、PCNA，P21，caspase-3表达用秩和检验。以上假设检验设定P0.05);但其平均每鼠荷瘤数及结直肠癌百分率都显著低于DMH组(P0.05)。CHLA组和CHLB组PCNA及Ras-p21蛋白表达均显著低于DMH组(P0.05)。但CHLA组和CHLB组之间比较时均无显著性差异(P>0.05)。
2.3免疫组化各指标观测结果
PCNA阳性染色仅限于细胞核，核呈棕黄色颗粒，在DMH组小鼠大肠组织中大多呈强阳性表达，经统计学分析，明显高于CHL组和NC组(P0.05)。
3讨论
叶绿素在医药上的研究始于20世纪20年代 ......
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