ESBLs 显色培养基的临床应用评价
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[摘要] 目的：超广谱β内酰胺酶(ESBLs)探讨显色培养基对患者标本中携带ESBLs大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的快速筛选作用。方法：将患者的粪便标本，同时用酶抑制剂增强试验和ESBLs显色培养基对产ESBLs的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌作筛选对比实验。结果：在110例粪便标本中， 43例在显色培养基显色，表示有ESBLs阳性的大肠埃希菌或肺炎克雷伯菌，1例不显色，其余66例未生长。与酶抑制剂增强试验符合率为95.3%，敏感性为97.7%。结论：显色培养基能快速检测筛选ESBLs阳性的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌，对控制院内感染、指导临床合理使用抗菌药物有积极意义。
[关键词] 显色培养基；大肠埃希菌；肺炎克雷伯菌；超广谱β内酰胺酶
[中图分类号]R378.2 [文献标识码] B[文章编号] 1673-7210(2009)02(b)-049-02
超广谱β内酰胺酶(ESBLs)是β内酰胺酶的一种类型，大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌是最常见的产ESBLs细菌。这些细菌不仅对β内酰胺类的抗生素耐药，而且对其他种类的抗菌药呈多重耐药，导致治疗困难，且易在医院内水平传播，引起暴发流行。因此，产ESBLs细菌感染已成为目前全球共同关注的重要感染问题之一。
目前临床实验室通常可根据耐药性判断推测产ESBLs细菌，然后用CLSI推荐的酶抑制剂增强试验验证，耗时较长。为此，笔者采用ESBLs显色培养基直接筛选患者标本，应用情况如下：
1 材料与方法
1.1 菌株来源
1.1.1 菌株收集2007年2～4月卫生部北京医院门诊及住院患者粪便标本110例，其中，住院患者68例，门诊患者42例，同一个患者只采集一次标本。
1.1.2 标准菌株大肠埃希菌ATCC 25922为阴性对照，肺炎克雷伯菌ATCC 700603为阳性对照。
1.2 抗生素和化学试剂
头孢噻肟(CTX，30 μg)、头孢噻肟/克拉维酸(CTX/CLAV，每片30 μg/10 μg)、头孢他啶(CAZ，30 μg)、头孢他啶(CAZ/CLAV，每片30 μg/10 μg)，E-test纸条由AB BIODISK，Sweeden公司生产，M-H营养琼脂干粉及ESBLs显色培养基均为法国梅里埃公司产品，批号810420601。
1.3 方法
将一份粪便标本同时接种血平板、中国兰及ESBLs显色培养基，血平板、中国兰上生长的革兰阴性杆菌及ESBLs显色培养基上显色的菌株，经VITEK 60鉴定为大肠埃希菌或肺炎克雷伯菌，鉴定值>90%，同时用酶抑制剂增强试验及E-test确证；在ESBLs显色培养基上大肠埃希菌为紫红色菌落，肺炎克雷伯菌为蓝绿色菌落，无色为其他菌属。各种颜色的菌落及血平板、中国兰上生长的可疑菌落均经VITEK 60全自动微生物检测分析仪鉴定到种。质控菌株大肠埃希菌ATCC 25922为阴性对照，肺炎克雷伯菌ATCC 700603为阳性对照。
2 结果
酶抑制剂增强试验:大肠埃希菌42株，ESBLs阳性40株，ESBLs阴性2株；肺炎克雷伯菌2株，ESBLs阳性1株，ESBLs阴性1株。显色培养基：大肠埃希菌41株，肺炎克雷伯菌2株。两种方法筛选ESBLs阳性株的性能比较差异无统计学意义。见表1。
3 讨论
用两种方法对比，ESBLs 显色培养基的特异性(95.3%)、敏感性(97.7%)均较高。同时用大肠埃希菌ATCC 25922，肺炎克雷伯菌ATCC 700603划线接种到ESBLs 显色培养基，前者24～48 h均未生长，后者为蓝绿色菌落。在试验过程中仅有1株在ESBLs显色培养基为无色菌株，被酶抑制剂增强试验确证为产ESBLs 大肠埃希菌。酶抑制剂增强试验筛选ESBLs株多采用血平板、中国兰培养、分离病原菌，发出报告至少3～4 d，显色培养基可直接初筛菌落而不需要传代培养，这与国外文献报道一致，24 h向临床发报告，能尽早指导临床用药。
显色培养基是一种较新的技术，直接根据菌落颜色肉眼判读即可对菌种作出鉴定，在混合感染中仍能迅速分离出目标菌，既节省时间又节约成本。
ESBLs是由质粒介导的能水解氧亚氨基β内酰胺类抗生素，并可被β内酰胺酶抑制剂所抑制的一类β内酰胺酶。ESBLs菌株具有多重耐药，常同时携带其他耐药基因，导致临床治疗的失败。准确区分产ESBLs和非产ESBLs菌株，不仅可指导临床合理用药，以免贻误病情和增加医疗费用，而且有利于产ESBLs菌株的管理，控制其传播，防止暴发流行，对于提高治疗效果和控制医院感染具有重要意义[1-3]。
随着科技的快速发展，国际上对临床菌种鉴定要求程序简化，并达到快速、准确的目的。目前显色培养基筛选微生物是一种较新的技术，本组所用的显色培养基基本工作原理是人工合成底物，由产色基团和微生物可代谢物质的部分组成，在特异性酶的作用下，游离出产色基团显示一定颜色，直接观察菌落颜色即可对菌种作出鉴定，该培养基上产ESBLs大肠埃希菌落呈紫红色，肺炎克雷伯菌呈蓝绿色。根据表格显示，显色培养基和酶抑制剂增强试验对筛选ESBLs菌株差异无统计学意义,不会对其生长产生抑制作用。与酶抑制剂增强试验比较，使用显色培养基操作简单，不需要特殊仪器，简化程序，节省成本，辨认混合菌感染方面其优势更明显，适用于各级医院ESBLs的快速初筛，不但可以直接检测患者的标本，还可以检测培养以后的细菌。
虽然显色培养基为感染标本提供了新颖、快捷、可靠的微生物检测和初步鉴定方法，但是我们也看到了这种培养基的不足，在实验过程中，我们检出3株肠杆菌科细菌，分别是产气肠杆菌、阴沟肠杆菌及2株粪肠球菌在ESBLs 显色培养基上产色，基于CLSI对其没有明确的规定，本组没有统计在内。过去我们只重视住院患者的检测，在实验过程中发现门诊患者ESBLs菌株有增高趋势 ......
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