孕妇HBV-DNA载量与胎儿宫内感染的关系
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[摘要] 目的：探讨孕妇血清中乙型肝炎病毒DNA (HBV-DNA) 载量与胎儿宫内感染发生率的关系。方法：通过荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测孕妇血清标本中HBV-DNA含量水平及新生儿血清标本中HBsAg、HBV-DNA情况。结果：128例HBsAg阳性孕妇的HBV-DNA检出阳性率为32.81%(42/128)，胎儿宫内感染率为17.97%(23/128)，且胎儿宫内感染率随血清HBV-DNA含量的增加而升高，HBV-DNA含量与胎儿宫内感染率呈正相关(χ2=7.44，P<0.01)，孕妇血HBV-DNA含量高时婴儿脐血HBsAg或HBV-DNA阳性率明显升高。结论：孕妇血清中HBV-DNA载量升高是造成胎儿宫内感染的主要因素之一。
[关键词] 孕妇；乙型肝炎病毒；宫内感染
[中图分类号] R714.7[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2009)03(b)-049-02
我国是乙型肝炎高发区，母婴传播是乙型肝炎病毒传播的主要途径之一，母婴传播引起的HBV感染在我国约占婴幼儿感染的1/3，也是造成乙肝流行的主要因素[1]。乙型肝炎是一种严重危害人类健康的传染病，因此本文应用FQ-PCR方法检测孕妇血清及其胎儿脐血中HBsAg、HBV-DNA的含量，并分析其相关性，进一步阐明孕妇体内乙肝病毒的含量与宫内感染的关系，积极采取免疫阻断措施来减少HBV母婴传播，降低乙肝的发生率。
1对象与方法
1.1研究对象
选择我院产科2007年3月～2008年5月住院并分娩的HBsAg阳性孕妇及其新生儿各128例。孕妇均为汉族，年龄24～35岁，平均27.7岁，其中HBsAg、HBeAg双阳性者占35.94%(46/128)，采集孕妇肘部静脉及新生儿出生1 h内股静脉血各4 ml。
1.2研究方法
1.2.1血清HBV-DNA定量检测根据阳性定量模板和待测样本的扩增情况，获得反应体系中待测样本中HBV-DNA的拷贝数(copies/ml)。
1.2.2 HBV宫内感染的判定标准新生儿出生后24 h股静脉血HBsAg、HBV-DNA任一阳性者。
1.3统计学方法
采用χ2检验、趋势χ2检验，P<0.05表示差异有显著性。
2结果
2.1标准HBV-DNA定量分析
HBV定量阳性质控标准品经FQ-PCR分析，以起始拷贝数的自然对数为横坐标，以循环阈值为纵坐标，可以得到一条严格的直线型标准曲线，斜率为-2.363，线性相关系数r>0.999。
2.2母儿血清HBV-DNA检测
HBsAg阳性、HBeAg阴性的孕妇中有42例血清HBV-DNA阳性，其中最小值为302 copies/ml，最大值为5.8×108 copies/ml。19例新生儿血清检出HBV-DNA，其中，最小值为32 copies/ml，最大值为2.4×107 copies/ml。HBsAg、HBeAg双阳性孕妇血清HBV-DNA共32例，其中，最小值为302 copies/ml，最大值为5.8×108 copies/ml。
2.3 HBV宫内感染率
128例HBsAg阳性孕妇所生新生儿中，7例HBsAg阳性，19例HBV-DNA阳性，新生儿任一项阳性者23例，合计HBV宫内感染率为17.97%(23/128)，HBsAg、HBeAg双阳性孕妇HBV宫内感染率为32.61%(15/46)。
2.4孕妇外周血HBV-DNA含量与HBV宫内感染的关系
将观察期内发生HBV宫内感染的新生儿作为病例组，其余未发生HBV宫内感染的新生儿作为对照组，分析孕妇HBV携带情况与新生儿HBV宫内感染的关系，结果显示HBV宫内感染组和非感染组孕妇HBV-DNA暴露水平差异有显著性(χ2=7.44，P<0.01)，进一步将128例HBsAg阳性孕妇血清HBV病毒载量按copies/ml分为3个等级：<103、103～106、106～109，各级病毒载量与HBV宫内感染关系，见表1。
表1 孕妇HBV载量与新生儿HBV宫内感染的关系(例)
3讨论
HBV宫内感染是发展成HBsAg慢性携带者的重要原因之一，也是导致乙肝疫苗免疫失败的主要因素[2]。因此，对HBV宫内感染率的正确估计，将有助于重新认识HBV宫内感染问题的严重性。关于活产新生儿HBV宫内感染率的报道差异较大。它随检测方法、标本来源以及研究对象病毒含量的不同而不同。以HBsAg阳性孕妇新生儿股静脉血HBsAg为指标，所得HBV宫内感染率为4%～15%[3]；若以HBV-DNA为指标，国外文献所得率为5.7%～55.56%[4]；国内为29.4%～61.0%[4]。
有关HBV宫内感染影响因素的研究报道，一致的结论是与孕妇HBV感染状态有关，国外研究结果表明，随着孕妇HBV-DNA水平的增高，婴儿被感染的危险性也呈增高趋势[5-6]。上述研究均采用斑点杂交法进行HBV定量，斑点杂交法本身是一种定性检查方法，敏感性低，在一定范围内不能反映出病毒含量的变化，本次研究利用FQ-PCR技术对孕妇血中HBV-DNA进行定量检测，更加准确地分析孕妇血清中HBV-DNA含量与HBV宫内感染的关系。
HBV宫内感染可导致新生儿HBV长期携带并可能导致肝硬化及肝癌的发生，所以寻找快速简便的检测方法，准确及早地预测HBV宫内感染针对性地采取预防措施是临床和预防医学工作者的愿望。通过本次研究，将128例孕妇外周血HBV拷贝数实测值及新生儿HBV宫内感染状况进行分析，结果显示，孕妇血HBV-DNA 172 copies/ml为HBV宫内感染最佳临界预测值。它的阳性预测值为42 ......
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