HPLC法测定右倍他米松磷酸钠注射液有关物质及含量(2)
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2.1.3 系统适用性试验精密称取右倍他米松磷酸钠与地塞米松磷酸钠对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每毫升中各含40 μg的溶液，作为系统适用性试验溶液。按“2.1.2”项下色谱条件，采用高效液相色谱仪测定，取系统适用性试验溶液20 μl注入液相色谱仪，右倍他米松磷酸钠峰与地塞米松磷酸钠峰的分离度应大于2.0，右倍他米松磷酸钠峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求；系统适用性试验色谱图见图1。取对照溶液20 μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的70%～90%；再精密量取供试品溶液与对照溶液各20 μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。
图 1 有关物质检查中系统适用性试验色谱图
(1.右倍他米松磷酸钠；2.地塞米松磷酸钠)
Fig.1 The chromatogram of system suitability test for related substances
(1.Dexbetamethasone sodium phosphate; 2.Dexamethasone sodium phosphate)
2.1.4 空白辅料的干扰性试验精密量取上述空白辅料溶液20 μl，按上述色谱条件测定，结果表明空白辅料对检测无干扰，色谱图见图2。
图 2 空白辅料干扰图谱
Fig.2 The chromatogram of interfering test for blank supplements
2.1.5 最低检测限精密量取上述供试品溶液适量，加流动相逐级稀释测定，当S/N≈3，样品浓度为0.1 μg/ml，进样20 μl，最低检出量为2 ng。
2.1.6 专属性试验精密量取右倍他米松磷酸钠注射液25.0 ml，各5份，分别置于50 ml烧瓶中，进行如下破坏性试验：
2.1.6.1 酸破坏加1 mol/L盐酸溶液5 ml，水浴加热回流30 min，取出，放冷，用1 mol/L 氢氧化钠溶液调至中性，然后转移至50 ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度。
2.1.6.2 碱破坏加1 mol/L氢氧化钠溶液5 ml，水浴加热回流30 min，取出，放冷，用1 mol/L盐酸溶液调至中性，然后转移至50 ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度。
2.1.6.3 氧化破坏加30%的H2O2溶液10 ml，室温放置5 h后，用流动相稀释至刻度。
2.1.6.4 热破坏水浴加热回流2 h，取出，放冷，然后转移入50 ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度。
2.1.6.5 光破坏光照(5 000 lx)5 d后，取出，用流动相稀释至刻度。
分别取上述破坏液摇匀，滤过，取20 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，在上述色谱条件下，右倍他米松磷酸钠注射液经酸、碱、氧化、热、光照破坏后所产生的杂质峰均能与主峰达到基线分离，说明在该色谱条件下能有效地测定本品有关物质。色谱图见图3。
E
图 3 破坏性试验色谱图
(A.酸破坏；B.碱破坏；C.氧破坏；D.热破坏；E.光破坏)
Fig.3 The chromatogram of destructive test
(A.Acid destroying; B.Alkalization destroying; C.Oxygen destroying;
D.Thermal destroying; E.Light destroying)
2.1.7 样品有关物质测定按“2.1.2”和“2.1.3”项下色谱条件与系统适用性试验，采用高效液相色谱仪测定右倍他米松磷酸钠注射液3批样品的有关物质，在供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，各杂质峰面积之和不得大于对照溶液主峰面积的5倍。结果批号为20080311、20080312、20080313的3批样品的有关物质分别为5.90%、6.13%、6.30%，平均值为6.11%。
2.2 含量测定
2.2.1 色谱条件和系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Hypersil ODS2柱，250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(1∶1)；检测波长为254 nm。理论板数按右倍他米松磷酸钠峰计算不低于2 000，右倍他米松磷酸钠峰与内标物峰的分离度应符合要求。色谱图见图4。
2.2.2 空白辅料溶液的制备取按处方比例制备不含右倍他米松磷酸钠的空白辅料溶液适量，以水为溶剂，配制成相当于含右倍他米松0.032 mg/ml的溶液，备用。
2.2.3 内标溶液的制备取对羟基苯甲酸乙酯适量，加甲醇制成每毫升中约含0.1 mg的溶液，摇匀，备用。
2.2.4 空白辅料干扰试验精密量取上述空白辅料溶液20 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，见图1。结果表明空白辅料对右倍他米松磷酸钠含量测定无干扰。
2.2.5 线性关系考察精密称取右倍他米松磷酸钠对照品约21 mg，置100 ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取上述溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 ml 置10 ml容量瓶中，再分别精密量取内标溶液2 ml 加入其中，然后加水稀释至刻度，摇匀，取20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图，以右倍他米松磷酸钠对照品浓度(X)为横坐标，右倍他米松磷酸钠与内标峰面积比值(Y)为纵坐标进行线性回归，得回归方程为Y=0.009 3X-0.017 6，r=0.999 8。结果表明，右倍他米松磷酸钠浓度在20.0～60.0 μg/ml范围内线性关系良好。
2.2.6 精密度试验取同一份供试品溶液分别连续进样6次，测定其峰面积，结果右倍他米松磷酸钠和内标的平均峰面积分别为1 185 306和2 693 123；其RSD分别为0.29%和0.14%，表明其进样精密度良好。
2.2.7 稳定性试验取同一份供试品溶液分别于0、2、4、8、12、24 h测定其峰面积，结果在考察的24 h内右倍他米松磷酸钠和内标的平均峰面积分别为1 183 068和2 690 929 ......
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