黄芪对肝纤维化的防治作用(2)
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参见附件。
1.2.3 取材在无菌无热源条件下,从大鼠腹主动脉采血,注入加有肝素的无热源玻璃试管中,离心取血浆置于玻璃试管中封口,低温保存。取新鲜肝左叶一部分立即固定于4%多聚甲醛中,24 h内石蜡包埋;一部分于-80℃保存。
1.2.4 染色行常规HE染色。
1.2.5天狼猩红胶原染色组织切片用天狼猩红染液室温孵育60 min,中性树胶封片,显微镜下进行观察。
1.2.6 肝组织HYP含量测定取冻存肝组织约0.2 g消化,取肝脏消化液1.0 ml,对照管为1.0 ml去离子水,然后依次加入:①0.1 mol/L柠檬酸缓冲液(pH 6.0)0.5 ml和0.05 mol/L氯胺T溶液1.0 ml,37℃水浴25 min;②3.15 mol/L过氯酸溶液1.0 ml,室温下作用5 min;③10%对二甲氨基苯甲醛溶液1.0 ml,100℃沸水5 min;④冰浴冷却,测定560nm处吸光度。制备标准曲线,在HYP标准曲线上求得待测肝组织HYP含量。
1.2.7产色基质偶氮法鲎试剂测定血浆内毒素参照试剂盒说明书操作。
1.3 统计学处理
数据以均数±标准差(x±s)表示,采用SPSS 11.5软件进行分析,行单因素方差分析(One-way ANOVA),SNK(q检验)进行两两比较,P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1一般情况及造模效果
实验过程中,正常对照组大鼠健康状况良好,肝脏表面光滑,颜色红润;模型组大鼠的活动及摄食减少,精神萎靡,体重下降,皮毛杂乱无光泽,肝脏表面不光滑,颜色灰暗,体积变大,边缘圆钝,肝组织HYP含量和肝FI明显升高;黄芪处理组大鼠症状比模型组轻,体重下降比较慢,肝组织HYP含量和肝FI比模型组降低,结果见表1。
2.2 HE染色
正常对照组肝组织结构清晰,肝细胞大小均匀,无变性、坏死,肝小叶结构存在,小叶内肝细胞索排列整齐;模型组肝细胞可见明显脂肪变性,汇管区纤维组织明显增生;黄芪处理组纤维组织增生不明显(图1) ......
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