利用体内电脉冲增强治疗型HBV DNA疫苗细胞免疫反应的研究(2)
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1.1.2.2 主要仪器BD FACS Calibur流式细胞仪为美国BD公司产品;CO2培养箱为Precision Scientific产品;96孔Minipore multiscreen板为美国BD公司产品;电脉冲药物导入仪(TERESA-EPTⅠ型)购自上海塔瑞莎健康科技有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 实验分组和免疫模式
清洁级Balb/c小鼠,随机分为6组(8只/组)。每只小鼠免疫注射pcDNAS2S,每次剂量为10 μg/只,注射部位为双侧胫前肌(TA)。Ⅰ组免疫模式:prime阶段,在待免疫注射部位实施EP,3 d后免疫注射;EP后第42天按同样方式在同一免疫注射部位开始实施boost。Ⅱ组免疫模式:prime阶段,免疫注射后立即实施EP;免疫注射后第42天按同样方式在同一免疫注射部位实施boost。Ⅲ组免疫模式:prime阶段,在待免疫注射部位实施EP,3 d后免疫注射;免疫注射后第42天开始实施boost,免疫模式为在同一免疫注射部位实施第二次免疫注射,其后立即实施EP。Ⅳ组免疫模式:prime阶段,免疫注射后立即实施EP,39 d后开始实施boost,免疫模式为在同一免疫注射部位实施EP,3 d后(即第一次免疫后第42天)实施第二次免疫注射。对照1组,仅有prime阶段,方法同Ⅰ组。对照2组,仅有prime阶段,方法同Ⅱ组。各组小鼠均在实施prime或boost后第14天处死,取脾细胞做酶联斑点免疫检测和流式细胞术分析。
1.2.2 体内电脉冲(electric pulse in vivo)方法
于DNA疫苗免疫注射部位进行体内电脉冲,技术参数如下:电压100 V,脉冲次数6次,波宽60 ms,频率60 Hz,正负电极间距5 mm。
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