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编号:11957063
丙型肝炎NS5A基因多克隆抗体的制备(3)
http://www.100md.com 2010年5月25日 刘秀财,李耕慧,郭伟华
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    参见附件(2425KB,3页)。

     2.5 HCV-NS5A融合蛋白的柱上复性和纯化

    超声后离心分离沉淀,包涵体洗涤液洗涤沉淀,收集充分洗涤后的包涵体,包涵体溶解液充分溶解,上清经Ni+亲和层析柱纯化、复性。取10 μl纯化融合蛋白进行SDS-PAGE分析,分析试剂盒测定蛋白浓度为1.1 μg/μl。

    2.6 多克隆抗体效价的ELISA法分析

    免疫后第1次与第2次抗体效价3次测量均值与免疫前3次测量均值比较,结果均大于2.1倍,证明X多克隆抗体效价>1∶128 000。

    3 讨论

    丙型肝炎的发展史为慢性肝炎-脂肪肝-肝纤维化-肝癌[6]。因为丙型肝炎发生机制复杂,相对于其他肝炎治疗困难,预后较差。因此,深入了解丙型肝炎的发病机制并进一步寻求有效的治疗方案是世界范围内的热点。

    目前公认HCC的发生是多因素协同作用的结果,然而,随着分子病毒学的研究发展,越来越多的研究结果表明HCV感染是HCC的主要致病因素之一[7],流行病学调查表明HCV感染者HCC的发病率较对照组人群高50倍以上,尽管HCV的确切致癌机制尚未完全阐明,但人们对HCV-基因及其产物NS5A蛋白与HCC之间的关系已有了多方面多层次的了解,且已经积累了大量研究资料[8] ......

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