大鼠骨髓内皮祖细胞SPIO标记及检测
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2.6 Calcein-AM/PI染色检测细胞存活率
Calcein-AM/PI染色后存活细胞胞浆呈现绿色，死细胞胞核呈现红色，标记细胞组(图4)与未标记细胞组细胞存活率均值分别为96%和97%，说明细胞标记后对其存活率无影响。
3 讨论
EPCS是能增殖并分化为血管内皮细胞，但尚未表达成熟的血管内皮细胞表型的前体细胞。在胚胎第15天左右，卵黄囊胚外中胚层的细胞聚集成细胞团形成血岛。多个血岛融合形成原始的血管，这些血管建立了最初的毛细血管网结构。血岛中央的细胞为造血干细胞，周边的细胞为EPCS[5]。研究证实，在成年动物的骨髓、脐血、外周血中都存在有EPCS，作为实验研究，大鼠骨髓容易获得，无需特殊处理，操作简单且EPCS含量丰富。原代EPCS培养过程中要注意以下两点：①无菌操作是关键；②操作过程动作宜轻柔，细胞贴壁前避免剧烈移动培养皿。
磁共振细胞成像可以被简单的定义为活体组织内靶向细胞和细胞行为的非侵入性和可重复性成像，是分子影像学在细胞水平的拓展和延伸，它的出现为示踪移植细胞提供了新的途径[6]。高分辨MRI是干细胞检测和示踪的理想手段[7-8]，外源性移植细胞必须标记磁共振对比剂，这样才能将细胞从其周围的组织中分辨出来。SPIO是目前MRI成像应用较广泛的对比剂，SPIO用于干细胞标记剂量越大，孵育的时间越长，标记水平越高，但是过多的铁会影响细胞的生物学活性及其增殖能力[9]。因此，选择适宜浓度的SPIO标记意义重大。Arbab等[10]研究表明，25 μg/ml SPIO标记不影响细胞的生物活性，且可获得较好的标记效果，而50 μg/ml SPIO标记影响细胞生物活性。因此，本研究采用25 μg/ml SPIO标记，结果表明：该标记方法可达到94%的标记率，且细胞的活力及增殖能力均不受影响，进一步说明了适量SPIO标记不影响EPCS的生物学特性。
干细胞移植治疗疾病已成为临床研究的热点。本实验采用了简单实用的方法从大鼠骨髓中分离、诱导，并在体外成功培养出EPCS，采用多种手段、多个方面地观察标记后细胞的生物学特性，并证明了该标记不影响其活性、增殖以及凋亡等，为今后EPCS的下一步进行活体示踪实验奠定了重要实验基础。
[参考文献]
[1]Asahara T, Murohara T, Sullivan A, et al. Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogenesis [J]. Science,1997,275(5302):964-967.
[2]Urbich C, Dimmeler S. Endothelial progenitor cells: characterization and role in vascular biology [J]. Circ Res,2004,95(4):343-353.
[3]Khakoo AY, Finkel T. Endothelial progenitor cells [J]. Annu Rev Med,2005,56:79-101.
[4]Murasawa S, Asahara T. Endothelial progenitor cells for vasculogenesis [J]. Physiology (Bethesda),2005,20(1):36-42.
[5]Suda T, Takakura N, Oike Y. Hematopoiesis and angiogenesis [J]. Int J Hematol,2000,71(2):99-107.
[6]王维英,邓钢.移植细胞的影像学示踪[J].中国医学影像技术,2006,22(5):782-784.
[7]Hsiao JK, Tai MF, Chu HH, et al ......
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