灯盏生脉胶囊对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用
 |
| 第1页 |
参见附件(1885KB，2页)。
1.4.3 神经功能缺损评分
由不了解实验分组的人员依据mNSS评分表[2]，在再灌注7、14、21 d分别对各组大鼠进行神经功能缺损评分。
1.4.4 体重增长率
分别计算各时间点体重变化，7 d体重增长率=(7 d体重-术前体重)/术前体重×100%；14 d体重增加率=(14 d体重-7 d体重)/7 d体重×100%；21 d体重增加率=(21 d体重-14 d体重)/14 d体重×100%。
1.4.5 脑梗死体积百分比的测定再灌注后21 d，每组大鼠各取3只，麻醉，断头取脑，置-20℃冰箱固定15 min，切为2 mm厚度的连续冠状切片。切片置于2%TTC溶液中，37℃恒温避光孵育30 min，4%多聚甲醛溶液固定24 h。正常组织呈红色，梗死组织呈苍白色。数码相机拍照，录入图像分析软件测量每一脑片缺血区的面积以及双侧大脑面积(S)，按梯形法公式求大脑体积V：V=(S1+ S2+S3…+Sn)×L-(S1+Sn)L/2，计算每个标本梗死区占整个大脑体积的百分比：梗死体积百分比=V缺血/V双×100%)。(S1：第一片的面积，Sn：最后一片面积，L：每个脑片的厚度)。
1.4.6 VEGF表达的检测
脑组织固定24 h后取缺血周边区脑组织常规石蜡包埋、切片、脱蜡、水化。按试剂盒说明书操作，DAB显色。光镜下观察，胞浆出现棕色颗粒为阳性着色细胞。高倍镜下(×400)在纹状体区随机各取5个视野计数阳性细胞，求其均数。
1.4.7 统计学方法
实验数据以均数±标准差(x±s)表示，应用SPSS 13.0统计软件进行分析，采用方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 神经功能缺损评分
假手术组大鼠麻醉清醒后无神经功能缺损症状。其他各组都出现神经行为缺损。缺血再灌注损伤后7、14、21 d，灯盏生脉胶囊组神经功能缺损评分明显低于模型组，见表1。
注：与模型组比较，▲P<0.05， ▲▲P<0.01
2.2 体重增长率
缺血再灌注术后大鼠体重7 d急剧下降，14 d下降缓慢，21 d体重略有上升。灯盏生脉胶囊组在各时间点体重增长率均显著高于模型组，见表2。
2.3 脑梗死体积测定
假手术组大鼠未发现苍白色梗死灶。灯盏生脉胶囊组和模型组均出现不同程度梗死灶，灯盏生脉胶囊组与模型组相比，脑梗死体积百分比显著下降，见表3。
2.4 VEGF表达结果
假手术组大鼠脑组织仅有少量VEGF表达，缺血再灌注损伤后表达明显增强，灯盏生脉胶囊组VEGF表达较模型组显著增加，见图1、表3。
3 讨论
已有研究发现，从灯盏细辛提取得到的有效成分灯盏花素能减少缺血再灌注大鼠脑组织丙二醛含量，提高超氧化物歧化酶、过氧化物酶及谷胱甘肽过氧化物酶活性，保护Na+-K+-ATP酶活性，从而对缺血再灌注脑组织产生保护作用[3]。灯盏生脉胶囊以灯盏细辛为主药，辅以人参、五味子、麦冬，具有益气养阴、活血健脑等功能，主治气阴两虚、瘀阻脑络引起的卒中后遗症等，已首次收载于《中国药典》2010年版。本研究以其为研究对象进行大鼠实验，结果显示灯盏生脉胶囊治疗组神经功能缺损评分、脑梗死体积较模型组显著降低，而体重增长率显著增加，表明灯盏生脉胶囊对缺血再灌注损伤具有保护作用。
VEGF是诱导血管生成的最强有力的血管形成因子，可高效、直接作用于血管内皮细胞上的两个受体Flt和Flk/KDR，刺激内皮细胞增殖并产生纤维蛋白溶酶原激活剂和胶原酶，促进内皮细胞移动和血管生成[4]。此外VEGF还可直接促神经发生和保护神经元[5]，如可刺激轴素生长，减少缺氧和兴奋性氨基酸所诱导的神经元死亡等。VEGF基因表达受缺氧诱导因子的调控[6]。脑缺血发生后，梗死周边区由于缺血缺氧，引起反应性的VEGF蛋白表达 水平上升，通过保护受损神经元以及促进侧支循环的建立而改善缺血症状。
本研究表明，缺血再灌注发生后，梗死灶周边区VEGF表达上调，这有助于缺血脑组织建立侧枝循环，以便及早恢复血液供应，使缺血缺氧对脑组织的损伤降至最低程度。灯盏生脉胶囊能增强VEGF表达，促进缺血区域内皮细胞增殖和新生血管生成，从而起到减轻缺血损伤的作用。
[参考文献]
[1]Longa EZ, Weinslein PR, Carlson S, et al. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats [J]. Stroke,1989,20(1):84-91.
[2]Schallert T, Kozlowski DA, Humm JL, et al. Use-dependent structural events in recovery of function [J]. Adv Neurol,1997,73:229-238.
[3]陈小夏,何冰.灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用[J].广东药学院学报,1997,13(2):90-93 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(1885KB，2页)。