食蟹猴大规模痢疾流行暴发病因调查和疾病控制预防(3)
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2.2 细菌生化编码鉴定
按细菌生化编码鉴定方法进行。经鉴定，优势菌为致病性大肠埃希菌，另一种为肺炎克雷伯菌，鉴定符合率为100%。
2.3 Vitek-2系统鉴定
Vitek-2全自动细菌生化鉴定系统鉴定两种菌ESBLs试验均为阴性，其中优势菌为致病性大肠埃希菌，另一种为肺炎克雷伯菌，鉴定符合率均为100%。该致病性大肠埃希菌血清型与大肠埃希菌Ⅰ群、Ⅱ群和Ⅲ群均不发生凝集反应，显示为未知血清型。
2.4 药敏试验结果
细菌药敏试验结果见表1。表1表明，本株大肠埃希菌对所试11种药物阿米卡星、头孢他啶、头孢唑啉、头孢哌酮、妥布霉素、阿莫西林克拉维酸钾、环丙沙星、亚胺培南、庆大霉素、氨苄西林、复方磺胺均敏感，其中头孢哌酮最敏感，氨苄西林则最差。肺炎克雷伯菌仅对头孢他啶、头孢唑啉、头孢哌酮、阿莫西林克拉维酸钾和亚胺培南敏感，其余则均为耐药。
表1食蟹猴肠道细菌药敏试验结果
Tab. 1Results of antibiotic susceptibility test
on cynomolgus bacteria
2.5 猴场所用药物药敏试验结果
我们采用手工自制药敏纸片的方法根据猴场兽医所使用的药物种类和实际使用的浓度制作了药敏纸片，用K-B法得到的细菌药敏试验结果见表2。
从表2可以看出，猴场所使用的药物中对于该株大肠埃希菌来说庆大霉素和小诺霉素完全耐药或已失效，敏感药物为头孢唑啉和头孢拉定，在使用标准浓度时阿米卡星和氨苄西林也敏感，但是猴场使用的药物治疗浓度对氨苄西林完全耐药，阿米卡星虽仍然敏感，但效果下降明显，显示药物标准浓度和实际使用浓度在疗效上存在较大差别。对于肺炎克雷伯菌来说除头孢唑啉和头孢拉定敏感外，其余情况下为全部耐药。
2.6 治疗方案纠正后效果
治疗方案改为我们推荐的方案后，输液后治疗效果明显，猴子精神不再下降，症状逐渐改善，一般连续给药治疗3 d后痊愈。同时对整个猴房尤其是粪便用生石灰进行了彻底的消毒。在得到细菌药敏结果后进一步确认了使用高敏感的抗生素进行静脉输液和肌肉注射治疗，经过近两个月的努力，控制了疾病流行，猴群健康状况得到了稳定，恢复了正常，无新发病例产生，疾病流行最终得到了控制。
3 讨论
本次调查中，我们体会到实验动物从业人员的素质和操作技能对动物疾病的预防控制和治疗起着十分重要的作用。饲养人员对疾病预防的重视和治疗技术的掌握程度是影响大规模疾病预防控制的关键。饲养人员培训和不断的知识更新是提高从业人员技能素质的较好方法。
从最先发病的是新进动物来看，猴场引进动物的管理有必要加强。该猴场引进动物方式主要为当地农民捕到猴子后先短暂饲养到一定数量再自行运到猴场，由于饲养设施不足，常与老猴群饲养于同一房间。这是本次痢疾发生后迅速扩散的主要原因。因此对新进动物捕获方式、运输方式和进场前的饮食饮水、来源地疫情状况都有必要作详细的了解，并对来自不同地区的动物分别进行隔离检疫，这对潜在的疾病流行控制是十分有效的措施。
志贺菌在食蟹猴中自然感染率较高，可达11%以上，通常情况下是引起菌痢的主要原因[5]。志贺菌也可导致金丝猴传染性菌痢[6]。大肠埃希菌是肠道内的正常菌群，通常情况下不会引发机体疾病[7]。但致病性大肠埃希菌和某些条件致病菌却可能因为机体免疫功能降低或环境剧烈改变应激反应而诱发疾病。尤其是野外猴子新进入猴场时神经高度紧张，饮食饮水、行为习惯环境、肠道微生物微生态环境等发生了巨大的变化，形成了强烈的应激反应，导致胃肠功能紊乱从而引起腹泻，腹泻进一步加剧了肠道微生物生态的失衡，最终诱发了肠道疾病。所调查的猴场无专门的检疫隔离饲养房间，新进猴与原有猴群混养于同一房间。这次大规模疾病暴发提示我们必需设立单独的检疫猴房，对新进猴必须严格隔离饲养至检疫期满，检疫期间对肠道带菌的情况进行培养分离鉴定，及时了解致病菌的情况。同时，应让新进猴逐步适应新的环境，减少猴子的应激反应，待猴子状况稳定下来后再转移到其他猴群中。
根据药敏结果，对于该株大肠埃希菌来说庆大霉素本来为敏感药物，但猴场使用的庆大霉素为完全耐药或已失效，敏感药物为头孢唑啉和头孢拉定，在使用标准浓度时阿米卡星和氨苄西林也敏感，但是使用猴场药物治疗浓度时氨苄西林则完全耐药，阿米卡星虽仍然敏感，但效果下降明显，这说明药物的保存也十分重要。猴场使用的小诺霉素虽然显示为完全耐药，但无新鲜药敏纸片作比较，是否确实耐药尚需作进一步实验确定。对于肺炎克雷伯菌来说除头孢唑啉和头孢拉定敏感外，其余情况下为全部耐药。药敏结果证实，原来猴场使用的治疗药物和剂量只有头孢拉定和头孢唑啉为敏感，阿米卡星药效下降，氨苄西林则显示为“耐药”，不能达到治疗目的。这与现场边治疗边死亡的情况是相符的，造成这种效果的主要原因是使用剂量严重不足。这提示我们虽然有些药物标准浓度药敏试验显示敏感可用于临床治疗，但如果在实际工作中使用浓度达不到治疗要求显然是没有疗效的，同时还会造成该药物不敏感或无效的假象，严重干扰了治疗药物的选择。庆大霉素对大肠埃希菌显示敏感，但猴场提供的庆大霉素则完全耐药，表明猴场提供的庆大霉素可能由于气候炎热和储藏的原因已经完全失去药效，不能再用于治疗猴子。 另外，依据药敏结果采用的抗生素在实际工作使用中发挥了预期的效果。这提示我们在猴群发生菌痢时，应及时分离菌株，进行药敏试验，在筛选出高敏的抗菌素的基础上对病猴进行治疗，方可提高治疗效果[8]。这充分说明药敏试验对指导用药的积极作用。在本次调查中，我们根据实际治疗用药情况手工制作了相应的药敏试纸纸片，为药物的选择和确认药物的效果提供了科学的指导，针对性和实用性都很强，值得在类似工作条件中加以推广。
本次培养分离得到的致病性大肠埃希菌血清型不在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ群之中，尚需作进一步的实验分析研究。
[参考文献]
[1]花秀春,时彦胜,孙兆增,等.人工饲养恒河猴、食蟹猴的繁殖性能初报[J].中国实验动物学报,2009,17(3):219-221.
[2]盘宝进,罗兆飞,符明泰,等.出口食蟹猴志贺氏菌的分离和初步鉴定[J].广西畜牧兽医,2002,18(2):6-15.
[3]李影林.临床医学检验手册[M].吉林:吉林科学技术出版社,1987:716.
[4]孔繁林.实用临床细菌鉴定[M].昆明:云南科技出版社,1997:64.
[5]杨宇蓉 ......
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