HPLC法和分光光度法测定茴三硫片含量的比较(2)
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2.1.7重复性试验 按“2.1.2”项下方法制备5份同一批号样品，分别进样20 μl，外标法计算茴三硫含量，结果含量的平均值为99.56%，RSD=1.05%(n=5)。
2.1.8 加样回收试验 按照处方比例的80%、100%、120%分别精密称取主药及处方量的辅料，混匀后按照“2.1.2”项下自“精密称取……”操作测定，测得茴三硫的平均回收率为99.68%，RSD=0.46%。结果见表1。
2.2 分光光度法
2.2.1供试品、对照品溶液的制备 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于茴三硫20 mg)，置100 ml量瓶中，加氯仿5 ml振摇使溶解，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 ml，置另一100 ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；再精密称取茴三硫对照品约20 mg，同法操作，即得对照品溶液。
2.2.2空白辅料溶液的配制与测定 取不含茴三硫的空白辅料，按上述供试品的制备方法配制，即得空白辅料溶液。取上述溶液以无水乙醇为空白，在432 nm的波长处测定，结果空白辅料无吸收，不干扰测定。
2.2.3线性关系试验 精密称取茴三硫对照品20.48 mg，置100 ml量瓶中，加氯仿5 ml使溶解，置水浴上加热溶解，冷却，再加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，再以无水乙醇稀释制成4.096、8.192、12.288、16.384、20.480 μg/ml浓度的溶液，照分光光度法测定，结果吸光度值分别为：0.194、0.385、0.582、0.762、0.933，以浓度C对吸光度A进行线性回归，得回归方程为：y=0.045 3x+0.014 7，r=0.999 6。表明在4.096～20.480 μg/ml浓度范围内其浓度与吸光度成良好线性。
2.2.4精密度试验 精密量取线性关系考察中储备液1.0 ml至10 ml容量瓶中，以无水乙醇定容至刻度，得浓度为10.30 μg/ml的溶液，多次测定，计算测定的精密度。试验证明RSD=0.15%，精密度良好。
2.2.5稳定性试验 取浓度为10.30 μg/ml的样品，在432 nm波长处测吸光度，每隔2 h测定一次，读取吸光度值，考察吸光度值的变化情况，测定5次，结果RSD=0.53%，表明样品在8 h内稳定。
2.2.6回收率试验 按照处方比例的80%、100%、120%分别精密称取主药及处方量的辅料，混匀后按照“2.2.1”项下操作测定，测得茴三硫的平均回收率为99.96%，RSD=0.44%。结果见表2。
2.3 HPLC法与分光光度法测定结果的比较
分别取“2.1.2”项下、“2.2.1”项下的溶液，照高效液相色谱法和分光光度法测定，计算茴三硫片中茴三硫的标示含量。三批样品测定结果见表3。
通过两种方法测定结果的比较可见，二者均可准确测定茴三硫片的含量，重现性好，差异较小，可作为茴三硫片的质量控制方法，但鉴于分光光度法专属性不强，可作为生产企业生产过程中间体的快速测定，HPLC法可作为终产品的质量控制方法。
3 讨论
茴三硫的含量测定方法文献多有报道，有紫外-可见分光光度法[1]、氯化钡滴定法[2]和高效液相色谱法[2-11]等，分光光度法和HPLC法均能快速、准确测定其含量，但两种测定方法的比较尚未见文献报道。
取浓度约为10 μg/ml 的茴三硫对照品溶液，在200~800 nm范围内扫描，结果在236 nm、346 nm、432 nm处有最大吸收，参考文献[3-11]中多选择以紫外区236 nm或346 nm为测定波长，本文参考“茴三硫”国家药品标准中含量测定的波长[1]，选用432 nm为测定波长，取得了较为满意的结果。
由于茴三硫在甲醇或乙醇等溶剂中溶解度有限，测定时往往因溶解不完全造成含量偏低。所以本次试验前处理过程中先以少量氯仿溶解，再加无水乙醇稀释，可将制剂中主成分完全溶出，减少了实验误差。
[参考文献]
[1] 国家药品监督管理局.茴三硫片药品标准[S].WS-10001-(HD-0726)-2002.
[2] 赵慧彬,崔彤霞.基于氯化钡滴定法测定茴三硫片中硫含量的研究[J].中国实用医药,2010,5(19):127-128.
[3] 宋丽华.HPLC法测定茴三硫片中茴三硫的含量[J].安徽医药,2010,14(2):165-167.
[4] 张蓉琴.高效液相色谱法测定茴三硫片含量[J].医学信息-医学影像与检验,2010,(10):3054-3055.
[5] 余佳芮,蒋学华 ......
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