检测重组hIL-12病毒滴度的空斑方法的建立
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陈梁军 福建生物工程职业技术学院;
【摘要】目的:建立检测重组hIL-12病毒滴度的空斑方法。方法:将一定浓度的Sf9细胞接种培养皿,待细胞完全贴壁后加入能表达hIL-12的重组杆状病毒感染Sf9细胞,一定时间后吸弃病毒液,加入预温到40℃的含0.5%低熔点琼脂、10%FBS以及其他添加剂的TC-100培养基,凝固后置于27℃条件下,培养5～7 d。结果:确定细胞接种数量为9×105个/皿,病毒液接种体积为500μl,感染时间为4 h进行病毒感染,用中性红染色即可用肉眼观察到空斑,空斑为圆形无色,直径为0.5～3.0 mm。结论:通过控制病毒液的接种体积和病毒的感染吸附时间,可以提高重组杆状病毒空斑方法的稳定性和准确性。
【关键词】 Sf细胞 人白细胞介素- 杆状病毒 空斑
【分类号】R392.1
自20世纪80年代初发现杆状病毒科核型多角体病毒的多角体蛋白基因(polh)的强启动子特性后,Smith与Sum-mer(1983)[1]首次建立了杆状病毒表达系统(Baculovirus Ex-pression Vector System,BEVS),该系统已成为当今基因工程领域四大表达系统之一。与大肠埃希菌、酵母和哺乳动物细
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1 材料与方法
1.1 材料
草地贪夜蛾细胞株(Sf9)及重组Ac-hILl2病毒为本学院实验室保存：TC-100培养基、胎牛血清(Fetal BovineSerum，FBS)、水解乳蛋白、酵母抽提物为GIBC0 BRL公司产品；中性红为SIGMA公司产品；低熔点琼脂糖(Seakem)为FMC公司产品。
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