疗癣卡西甫散的药效学研究(2)
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1.空白对照组；2.阳性药组；3.粉末低剂量组；4.浸膏低剂量组；
5.粉末中剂量组；6.浸膏中剂量组；7.粉末高剂量组；8.浸膏高剂量组
在光学显微镜下观察组织病理切片(图1)及统计数据分析(表1)结果显示，小鼠阴道上皮有丝分裂细胞主要分布在基底层，空白对照组中有丝分裂(核分裂)数最多，表明银屑病小鼠阴道上皮细胞有丝分裂模型造模成功。与空白对照组比较，疗癣卡西甫散粉末组和浸膏组对该模型均具有不同程度的有丝分裂抑制作用。此外，在相同给药剂量水平下，浸膏组在对小鼠阴道上皮细胞的有丝分裂的抑制方面，作用较之粉末组均有所增强。这可能与传统粉末制备组的有效药物成分始终保留在植物组织细胞之内有关，因细胞壁的阻隔作用，影响了机体对药效成分的直接吸收。
2.2 疗癣卡西甫散含药血清对HaCat细胞的增殖作用
选取40只SD大鼠，称取体重，随机分成8组，每组5只，分别为正常组、消银颗粒组(阳性药组)、粉末高剂量组、粉末中剂量组、粉末低剂量组、浸膏高剂量组、浸膏中剂量组、浸膏低剂量组。SD大鼠禁食12 h后，空白对照组用0.5%的CMC-Na灌胃，阳性药组灌以消银颗粒1.365 g/kg，其余各组用药剂量均折算成生药量，粉末高剂量组和浸膏高剂量组(20×临床用药剂量)浓度为10.4 g/kg，粉末中剂量组和浸膏中剂量组(10×临床用药剂量)浓度为5.2 g/kg，粉末低剂量组和浸膏低剂量组(5×临床用药剂量)浓度为2.6 g/kg，每天给药2次，连续给药3 d。末次给药2 h后，乙醚麻醉，腹主动脉取血，静置1 h，3 000 r/min离心10 min，吸取上层血清，56℃水浴灭活后，超净工作台中0.22 μm过滤除菌，-20℃冰箱保存备用。取对数期生长的HaCat细胞以1.0×104/ml接种于96孔培养板中，每孔100 μl；24 h后弃培养液，加入粉末和浸膏的高、中、低3种剂量含药血清和正常血清，各组设20%的血清浓度，每孔均为100 μl，设8个复孔；共培养48 h后，每孔加入20 μl MTT(5 mg/ml)，孵育4 h，弃上清，每孔加入200 μl DMSO，待沉淀充分溶解后，用酶标仪测定490 nm波长下光密度(optical density，OD)值。生长抑制率=(1-给药组OD值/空白组OD值)×100%。见表2。
根据生长抑制率公式可知，生长抑制作用的强弱与药物的OD值密切相关，并呈一定的负相关。由表2的HaCat细胞给药结果显示，无论是传统粉末制剂还是提取后的浸膏制剂，均对HaCat细胞的增殖具有抑制作用(各给药组OD490明显较空白对照组降低)，这表明疗癣卡西甫散具有治疗银屑病的作用。利用t检验发现，经现代工艺提取后，浸膏组对HaCat细胞的增殖抑制作用要明显强于传统的粉末制剂组。
3 讨论
银屑病的治疗相当复杂漫长，但维吾尔医药在治疗该病方面具有其独到之处。根据新疆40多家维吾尔医医院对银屑病的治疗效果显示，维吾尔医药在治疗银屑病方面，具有疗效显著，无毒副作用的特点。维吾尔医学非常重视人体的整体性，系统治疗，内外同治。依据维吾尔医理论，银屑病的病变虽在皮肤局部，但机体内环境的改变却是最为重要的。因而，银屑病的治疗应平衡体液，调整气质。清除碱性黏液质和异常黑胆质以清血之热，止痒消炎为主[6]。银屑病的发病机制，迄今为止仍无定论。现代医学研究表明，银屑病患者大都表现为角质形成细胞的过度增殖和分化异常[7]。当前，银屑病治疗药物的临床研究资料中，其非临床有效性评价所选模型，均选择了3个主要试验进行，即对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂的影响试验、对大鼠尾部鳞片表皮颗粒层形成的影响试验、对动物心得安致耳廓皮损的试验[8]。该3项试验均是针对银屑病患者表皮的主要病理特点而设计，即角质形成细胞的过度增殖和分化异常。
疗癣卡西甫散是维吾尔医治疗银屑病的常用药方，目前关于该复方的研究资料很少，对于其治疗银屑病的作用机制也不明确。本研究分别通过动物体内(小鼠银屑病模型)和体外(角质形成细胞HaCat)药效学实验，揭示了疗癣卡西甫散可能是通过抑制角质形成细胞的过度增殖，来达到治疗目的的。但是，该药对角质形成细胞的增殖抑制机制，仍需进一步通过细胞和分子生物学实验来阐明。此外，疗癣卡西甫散是维吾尔药仅有的几个散剂当中的一个具有清除碱性异常黏液质的复方制剂。尽管其散剂粉状颗粒的比表面积大、容易分散、起效快、剂量容易控制，但由于其吸湿性较强，颗粒极易聚集，表面会形成一层水系黏膜，不利于机体对药效成分的吸收。加之，传统粉末制剂的有效药物成分仍保留在植物组织细胞之内，因细胞壁的阻隔作用，阻碍了机体对药效成分的直接吸收。这些都可能是导致传统粉末制剂不如现代工艺提取制剂组药物作用效果的原因。因而，利用现代医药学技术研究高效的维吾尔医制剂，突出维吾尔医的特色，是维吾尔医药发展的必由之路。本研究通过在相同给药剂量下，比较疗癣卡西甫散传统粉末制备组和现代工艺制备组的药效作用，从而为疗癣卡西甫散传统粉末制剂的制备工艺现代化奠定理论基础。
[参考文献]
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[6] 阿不都热依木.异常黑胆质成熟剂和清除剂对OH-引起的DNA的保护作用[J].中药药理与临床,2000,16(3):34-35 ......
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