正交设计优选碎米糖化液的脱色工艺(2)
 |
| 第1页 |
 |
| 第4页 |
参见附件。
2.1.7 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24 h后测定峰面积，计算RSD为2.72%，结果表明供试品在24 h内稳定性良好。
2.1.8 重复性试验 取同一批糖化液6份，按“2.1.2”项下的方法制成供试品溶液，按“2.1.5”项下的方法测定其峰面积，计算RSD为2.07%，表明溶液有较好的重复性。
2.1.9 加样回收率试验 精密量取已知含量的糖化液9份，分别精密加入80%、100%和120%的葡萄糖对照品各3份，按“2.1.2”项下的方法制成供试品溶液，按“2.1.5”项下的方法测定其峰面积，计算葡萄糖的平均加样回收率为98.76%，RSD为2.07%。
2.1.10 葡萄糖保留率的测定 取脱色后的糖化液测定其葡萄糖含量，与未经活性炭脱色品比较，计算其葡萄糖保留率。保留率(%)＝(脱色后葡萄糖含量/脱色前葡萄糖含量)×100%。
2.2 色素吸光度的测定[1]
将滤纸过滤后的糖化液进行全波长扫描，结果表明，糖化液在254 nm处有最大吸收，故选择此波长为检测波长，测定糖化液的吸光度，用蒸馏水作空白液，在254 nm处测定脱色后的吸光度。脱色率(%)＝[(脱色前色素吸光度-脱色后色素吸光度)/脱色前色素吸光度]×100%。
2.3 正交试验设计
在单因素实验考察的基础上，选取活性炭用量、加热温度及脱色时间等主要因素进行正交试验，进一步优选其脱色工艺条件，因素水平的设计见表1。精密量取糖化液100 mL共9份，分别置于250 mL锥形瓶中，加入一定量的活性炭(按糖化液的固形物含量比例计)，在一定的温度下水浴脱色一定的时间，不断振摇，过滤后，分别照“2.1”和“2.2”项下的方法测定葡萄糖保留率及脱色率。结果见表2，方差分析结果见表3。
由方差分析结果可知，因素A对综合指标的影响有显著性(P < 0.05)，结合其极差分析，选取A2水平；B、C对指标影响均无显著性，但结合单因素考察结果、极差分析结果及生产实际情况，B和C因素均选取水平2。综合分析，确定出糖化液的脱色较优工艺条件是A2B2C2，即糖化液加入3%的活性炭后，在70℃下脱色40 min。
2.4 验证试验
按上述较优工艺条件制备3批样品，进行工艺验证，结果葡萄糖的平均保留率为94.76%，RSD为1.83%；平均脱色率为96.39%，RSD为2.16%。可见按优化工艺进行脱色，葡萄糖的保留率及脱色率均取得较理想的结果，表明该工艺合理、稳定、可行。
3 讨论
在医药生产中常见的脱色剂有活性炭、双氧水、DEAE纤维素、大孔树脂及离子交换树脂等，其中活性炭的脱色能力和生产成本等性价比，在糖化液的脱色生产中是相对最高的，且不会影响产品的化学性质，故本研究采用活性炭作为糖化液的脱色剂。目前测定葡萄糖含量的方法有化学法、气相色谱法、离子色谱脉冲安培法、毛细管电泳电化法、液相色谱蒸发光散射检测法等。但这些方法具有操作繁琐、测量结果难判定、检测仪器价格昂贵、专用性强、普及程度不高等缺点[2]。高效液相色谱法虽已有报道[2-5]，但经多次预试发现这些条件均对本研究中糖化液样品的分离效果较差而改用本文所述方法。
笔者在前期进行过单因素实验，分别考察了活性炭用量、糖化液的pH值、加热温度及加热时间等4个主要影响因素，发现其中活性炭的用量对葡萄糖的保留率及脱色率影响最显著，其余因素影响相对较小。考虑到为了制备纯度高的注射用葡萄糖原料，在脱色过程中不宜再加入酸、碱等新杂质调整糖化液的pH值，故本实验不再考虑本来影响脱色效果较小的因素pH值，进一步考察研究其余3个因素对糖化液脱色效果的影响大小，对其脱色工艺条件初步优化。为此，本研究已申请专利(申请号为201010547831.2)。
若制备注射用葡萄糖，还需深入细致研究，结合吸附蛋白质的情况，采用精度和预测性更好的星点设计-效应面法[6]优化，可取得最佳脱色工艺条件。结合后续的去离子工序后进行的第2次脱色研究，可进一步纯化葡萄糖，并可将第2次脱色所用的活性炭充分利用到第1次脱色过程中，也可大大节约生产成本。
[参考文献]
[1] 周鸿立，吴德恒，董卫权，等.玉米须多糖脱色工艺条件的研究[J].上海中医药杂志，2010，44(4)：76.
[2] 林长钦，李颖怡，刘垚.高效液相色谱示差法测定蜂蜜中的果糖、葡萄糖、蔗糖[J].广东农业科学，2010，37(4)：254-256.
[3] 张书芬，史萍萍，王全林，等.液相色谱示差折光法测定蜂蜜中的果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖[J] ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(2925kb)。