芒果苷乳膏质量标准研究
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芒果苷(mangiferin)是从芒果叶中提取得到的一种多酚类化合物，是藏茵陈治疗肝炎的主要有效成分，是知母根茎中抗病毒的活性成分，又是古巴国内广受欢迎的抗氧化功能的营养补充剂(food supplement)VIMANG中的主要有效成分。VIMANG是一种从芒果Mangifera indica L.树皮提取得到的溶液制剂，并进一步制成VIMANG片(规格为每片含芒果树皮提取物300 mg)[1]。利用丰富的芒果叶资源，提取可具有药用价值的芒果苷，可带来重大的经济效益及社会效益。本课题组依托丰富的芒果苷资源及深厚的研究基础，拟开发一种用于治疗疱疹病毒感染的芒果苷乳膏剂。按照《药品注册管理办法》要求，在确定芒果苷乳膏(规格为0.5 g/10 g)制备工艺后，对芒果苷乳膏的质量标准进行研究，本文着重报道芒果苷乳膏的薄层鉴别和含量测定[2-6]，为制订制剂的质量标准提供研究基础。
1 仪器与试药
1.1 仪器
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Waters 2695高效液相色谱仪(Waterse-2489 UV检测器，Waters公司)，Diamonsil C18(2)色谱柱(250.0 mm×4.6 mm，5 μm，DIKMA公司)，BS1103电子天平(北京Sartorius公司)，硅胶G预制板(青岛海洋化工厂)，高速离心机(北京离心机厂)。
1.2 试药
芒果苷原料药(从芒果Mangifera indica L.的叶中提取纯化，纯度>98.0%，广西中医学院中药学教研室提供)，芒果苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号：111607-200402，纯度>99.0%)，芒果苷乳膏(5%，g/g，自制)，甲醇、乙腈(色谱纯，Fisher)，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 性状
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根据3批样品观察，本品为淡黄色至黄色乳膏，外观细腻、均匀，易于涂布在皮肤上。
2.2 薄层鉴别
取本品约100 mg，加40%甲醇50mL，超声30 min，放冷，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取芒果苷对照品，加甲醇制成0.1 mg/mL溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)考察，吸取上述两种溶液各1 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-正丁醇-甲酸(3.5∶4.0∶5.0)为展开剂，展开，取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，105℃烘烤显色，置365 nm紫外光下检视。结果显示，供试品色谱中在与对照品相应的位置上，显相同浅蓝色荧光斑点，芒果苷斑点的Rf值为0.4~0.5。
2.3 检查
2.3.1 粒度取3批芒果苷乳膏适量，涂成薄层，薄层面积相当于盖玻片的面积，覆以盖玻片，每个批号涂3片，照粒度测定法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅺ B第一法)测定，未检出大于180 μm的粒子。
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2.3.2 最低装量照最低装量检查法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅻ C)检查，符合规定。
2.3.3 微生物限度照微生物限度检查法(《中国药典》2010年版一部附录XⅢ C)检查，结果显示，细菌数6个/g、霉菌和酵母菌数40个/g、未检出控制菌(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌)，结果符合规定。
2.4 含量测定
2.4.1 色谱条件色谱柱Diamonsil C18(2)(4.6 mm×250.0 mm，5 μm)；流动相乙腈-0.1%冰醋酸(15∶85)；流速为1 mL/min；检测波长为258 nm；柱温为30℃；进样量10 μL。在上述色谱条件下芒果苷峰理论板数不低于3 500。
2.4.2 对照品溶液的制备精密称取芒果苷对照品适量，置50 mL容量瓶中，加40%甲醇适量使溶解，并稀释至刻度，超声10 min，放冷，摇匀，即得每1 mL含212.0 μg的对照品溶液。
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2.4.3 供试品溶液的制备称取芒果苷乳膏100 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加入40%甲醇适量使溶解并定容至刻度，超声10 min，冷却至室温，即得。
2.4.4 阴性对照溶液的制备称取空白基质100 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加入40%甲醇适量使溶解并定容至刻度，超声10 min，冷却至室温，即得。
2.4.5 线性关系考察精密吸取芒果苷对照品溶液1.25、2.50、5.00、10.00、20.00 μL注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积Y对芒果苷浓度X(μg/mL)进行回归，回归方程为Y = 47 879 935.566 9X-730 909.942 4(r = 0.999 2)，芒果苷浓度在26.5～424.0 μg/mL范围内与峰面积有良好的线性关系。芒果苷对照品、供试品、阴性对照溶液HPLC图谱见图1。
2.4.6 精密度试验精密吸取对照品溶液10 μL，注入色谱仪，记录峰面积，重复进样6次，峰面积RSD值为2.01%(n=6)，表明仪器精密度良好。
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2.4.7 稳定性试验取同一份供试品溶液，分别于0、1、2、4、6、12、24 h进样分析，依法测定峰面积，RSD值为1.82%(n = 7)，表明样品溶液在24 h内稳定。
2.4.8 重复性试验精密称取同一批号乳膏6份，按“供试品溶液的制备”项处理，制成供试品溶液，按上述色谱条件测定芒果苷峰面积，按照外标法计算乳膏中芒果苷的平均含量为5.39%(RSD = 1.11%，n = 6)。
2.4.9 加样回收率试验取芒果苷乳膏6份，精密称定重量，分别加入芒果苷对照品适量，按“供试品溶液的制备”项处理，依法测定芒果苷的量，并计算平均回收率为102.4%，(RSD = 0.84%，n = 6)。见表1。
2.4.10 样品测定取3批芒果苷乳膏，照“供试品溶液的制备”项处理得到供试品溶液，精密吸取供试液10 μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定芒果苷面积，按外标法计算乳膏中芒果苷的含量，结果见表2。
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3 讨论
3.1 样品的处理方法
芒果苷的溶解度较低，在40%左右的甲醇溶液中溶解度较大，用40%甲醇作为样品提取溶剂时的回收率符合要求，最终选取40%甲醇作为提取溶剂。
3.2 检测波长的考察
芒果苷200~400 nm范围内其最大吸收波长为258 nm[1]，且实验发现空白基质在258 nm处无吸收峰，故选择258 nm作为制剂中芒果苷的检测波长。
3.3 含量限度范围的确定
芒果苷的溶解度很低，处方量的芒果苷不能完全溶解在乳膏中，即乳膏制剂中的芒果苷以混悬状态存在，在制剂制备过程中，芒果苷难以达到理想的均匀分散状态。根据实测数据，拟定芒果苷乳膏含量限度为标示量的90%~110%。
(收稿日期：2011-12-27本文编辑：卫 轲), http://www.100md.com(吴玉强 邓家刚 梁健钦等)