高效液相色谱法测定硫酸氢氯吡格雷片有关物质(2)
2.3.3 溶液稳定性考察
取硫酸氢氯吡格雷片细粉适量(约相当于硫酸氢氯吡格雷25 mg)，精密称定，置100 mL量瓶中，加甲醇适量使溶解，再加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，作为样品溶液，分别于日内(0、2、4、6 h)分别吸取10 μL注入液相色谱仪，通过测定样品杂质个数及有关物质总量(按面积百分比)变化情况来考察样品溶液稳定性。结果主峰A的RSD=0.58%。不同时间段的主峰A见表1。
上述试验结果表明，硫酸氢氯吡格雷样品溶液经6 h后，主峰稳定，杂质种类和个数均未有增加，仅杂质总量稍有增加(但变化也在0.05%范围内)，为准确测量硫酸氢氯吡格雷有关物质，建议在样品溶液配制后6 h内测定。
2.3.4 检测限
取空白基线一段，测量其噪音峰高，将样品溶液用流动相稀释至适当浓度，10 μL进样，使其主药峰高约为噪音峰高的3倍，此时的进样浓度为0.008 μg/mL，最低检出限为0.08 ng，检测限结果显示，上述有关物质检测供试品溶液浓度是适宜的。
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2.3.5 杂质A、B、C方法学考察
2.3.5.1 杂质线性范围考察分别取氯吡格雷杂质A、B、C适量，精密称定，分别加甲醇溶解，再用流动相稀释制成一定浓度的对照品溶液，分别取不同体积，用流动相稀释成不同浓度，再分别取10 μL进样，记录色谱图，量取峰面积，由溶液浓度(C)对峰面积(A)线性回归，得回归方程。结果本方法线性良好。见表2。
2.3.5.2 精密度试验分别取氯吡格雷杂质A、B、C适量，精密称定，分别加甲醇溶解，再用流动相稀释制成一定浓度的对照品溶液，取对照品溶液10 μL重复进样6次，考察其精密度，结果杂质A精密度试验RSD为0.49%，杂质B1 RSD为0.75%，杂质B2 RSD为0.74%，杂质C RSD为0.68%。表明本方法杂质A、B、C精密度良好，符合规定。
2.3.5.3 稳定性试验分别取杂质A、B、C同一份溶液，于日内(0、2、4、6、8 h)测定，计算日内差。结果杂质A稳定性试验RSD为0.55%，杂质B1 RSD为0.76%，杂质B2 RSD为0.62%，杂质C RSD为0.67%。表明本方法杂质A、B、C稳定性良好，符合规定。
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2.3.5.4定量限取空白基线一段，测量其噪音峰高，分别取杂质A、B、C对照品适量，用流动相溶解稀释至适当浓度，10 μL进样，使其主药峰高约为噪音峰高的10倍，此时的杂质A进样浓度为0.009 μg/mL，杂质B进样浓度为0.025 μg/mL，杂质C进样浓度为0.046 μg/mL，故杂质A定量限为0.09 ng，杂质A定量限为0.25 ng，杂质A定量限为0.46 ng。定量限结果显示，上述有关物质检测供试品溶液浓度是适宜的，杂质A、B、C可以准确检出。
2.4样品测定
取硫酸氢氯吡格雷片、波立维、泰嘉，按“2.2”项下条件下制备供试品溶液、对照品溶液，另取氯吡格雷杂质A对照品，氯吡格雷杂质B对照品、氯吡格雷杂质C对照品、按“2.2”项下条件制备对照品溶液，液相色谱法检测。杂质A、B、C按外标法计算，其他杂质按主成分自身对照法计算样品的有关物质。见表7。
3 讨论
参照文献[3-4]，对流动相条件进行考察，发现这些条件中间体及杂质分离度不符合规定，不能准确检测样品的有关物质，最终参照美国药典色谱条件对中间体及杂质进行考察，并对样品进行强制性破坏性试验，结果各中间、杂质、降解物质与样品分离良好，辅料不干扰测定，检测限也符合要求。本方法用于检测硫酸氢氯吡格雷片有关物质专属性强，灵敏度高。
(收稿日期：2011-06-20本文编辑：卫 轲), http://www.100md.com(李飞 张黎娟 孟祥松等)
取硫酸氢氯吡格雷片细粉适量(约相当于硫酸氢氯吡格雷25 mg)，精密称定，置100 mL量瓶中，加甲醇适量使溶解，再加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，作为样品溶液，分别于日内(0、2、4、6 h)分别吸取10 μL注入液相色谱仪，通过测定样品杂质个数及有关物质总量(按面积百分比)变化情况来考察样品溶液稳定性。结果主峰A的RSD=0.58%。不同时间段的主峰A见表1。
上述试验结果表明，硫酸氢氯吡格雷样品溶液经6 h后，主峰稳定，杂质种类和个数均未有增加，仅杂质总量稍有增加(但变化也在0.05%范围内)，为准确测量硫酸氢氯吡格雷有关物质，建议在样品溶液配制后6 h内测定。
2.3.4 检测限
取空白基线一段，测量其噪音峰高，将样品溶液用流动相稀释至适当浓度，10 μL进样，使其主药峰高约为噪音峰高的3倍，此时的进样浓度为0.008 μg/mL，最低检出限为0.08 ng，检测限结果显示，上述有关物质检测供试品溶液浓度是适宜的。
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2.3.5 杂质A、B、C方法学考察
2.3.5.1 杂质线性范围考察分别取氯吡格雷杂质A、B、C适量，精密称定，分别加甲醇溶解，再用流动相稀释制成一定浓度的对照品溶液，分别取不同体积，用流动相稀释成不同浓度，再分别取10 μL进样，记录色谱图，量取峰面积，由溶液浓度(C)对峰面积(A)线性回归，得回归方程。结果本方法线性良好。见表2。
2.3.5.2 精密度试验分别取氯吡格雷杂质A、B、C适量，精密称定，分别加甲醇溶解，再用流动相稀释制成一定浓度的对照品溶液，取对照品溶液10 μL重复进样6次，考察其精密度，结果杂质A精密度试验RSD为0.49%，杂质B1 RSD为0.75%，杂质B2 RSD为0.74%，杂质C RSD为0.68%。表明本方法杂质A、B、C精密度良好，符合规定。
2.3.5.3 稳定性试验分别取杂质A、B、C同一份溶液，于日内(0、2、4、6、8 h)测定，计算日内差。结果杂质A稳定性试验RSD为0.55%，杂质B1 RSD为0.76%，杂质B2 RSD为0.62%，杂质C RSD为0.67%。表明本方法杂质A、B、C稳定性良好，符合规定。
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2.3.5.4定量限取空白基线一段，测量其噪音峰高，分别取杂质A、B、C对照品适量，用流动相溶解稀释至适当浓度，10 μL进样，使其主药峰高约为噪音峰高的10倍，此时的杂质A进样浓度为0.009 μg/mL，杂质B进样浓度为0.025 μg/mL，杂质C进样浓度为0.046 μg/mL，故杂质A定量限为0.09 ng，杂质A定量限为0.25 ng，杂质A定量限为0.46 ng。定量限结果显示，上述有关物质检测供试品溶液浓度是适宜的，杂质A、B、C可以准确检出。
2.4样品测定
取硫酸氢氯吡格雷片、波立维、泰嘉，按“2.2”项下条件下制备供试品溶液、对照品溶液，另取氯吡格雷杂质A对照品，氯吡格雷杂质B对照品、氯吡格雷杂质C对照品、按“2.2”项下条件制备对照品溶液，液相色谱法检测。杂质A、B、C按外标法计算，其他杂质按主成分自身对照法计算样品的有关物质。见表7。
3 讨论
参照文献[3-4]，对流动相条件进行考察，发现这些条件中间体及杂质分离度不符合规定，不能准确检测样品的有关物质，最终参照美国药典色谱条件对中间体及杂质进行考察，并对样品进行强制性破坏性试验，结果各中间、杂质、降解物质与样品分离良好，辅料不干扰测定，检测限也符合要求。本方法用于检测硫酸氢氯吡格雷片有关物质专属性强，灵敏度高。
(收稿日期：2011-06-20本文编辑：卫 轲), http://www.100md.com(李飞 张黎娟 孟祥松等)