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编号:12209598
VEGF-siRNA在肾癌中的实验研究(2)
http://www.100md.com 2012年3月25日 《中国医药导报》 2012年第9期
     1.1.8 细胞生长曲线将肾癌细胞786-0制成细胞悬液接种于96孔板上,每孔浓度1×107/L,24 h后更换培养液,同时加入不同浓度的siRNA,每隔24 h取3孔做细胞计数,取平均值。

    1.1.9 CCK-8法很多实验应用MTT方法,但是CCK-8在实验中具有简便、安全、精确的优点。步骤:接种细胞悬液于96孔板内,经37℃、5% CO2培养箱培养至细胞贴壁,再分别加入不同浓度的Ki67 siRNA,,每一浓度做3个复孔,并以negative siRNA和空白做对照,37℃下5% CO2培养箱培养72 h,有另外几孔已知数量的活细胞以备制标准曲线。将CCK-8试剂解冻,每孔加入10 μL,注意不能有气泡,放置培养箱4 h。用酶标仪检测在450 nm波长的吸光度,参照对照比630 nm波长。根据公式抑制率=(1-实验组A值/阴性对照A值)×100%计算抑制率。

    1.2 体内实验部分

    1.2.1 小鼠分组动物实验模型的建立与分组:给予正常的18只小鼠正常喂养,然后将小鼠标有数字,写在卡片上,放在暗箱中随机分组,将其分为3组,分别是目的组(VEGF),绿色荧光组(GPF),空质粒组(Control),每组6只小鼠,将小鼠进行同样饮食饲养,饲养天数为21 d。然后将体外培养好的带有目的基因的肾癌细胞,配制密度1.0×107个/mL,在每只小鼠的背部皮下注射细胞悬液约0.3 mL,然后正常喂养小鼠,其他两组依次按此法喂养。

    1.2.2 计算测量肿瘤大小观察瘤体体积:在正常饲养小鼠的情况下,每隔1 d用卡尺测量最大直径的长度A和与之垂直的最大宽径B ......
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