1.4 MDC荧光染色

    将对数生长期的细胞接种于6孔板中，待细胞贴壁且生长密度达80%～90%时弃去原培养液，PBS洗涤2次后加处理因素，共设SN50及空白对照两组：SN50组加入20 μmol/L的SN50、空白对照组加入等体积生理盐水，在5%CO2、37℃、饱和湿度下培养48 h，弃去培养液，PBS洗涤2次后加入终浓度为0.05 mol/L的MDC染液，37℃避光作用1 h，弃去染液后PBS洗涤3次；加入DAPI浓液，室温避光孵育5 min，PBS洗涤2次后，倒置荧光显微镜(Olympus)350 nm发射滤片下观察。

    1.5 Western blot检测LC3-Ⅱ蛋白的表达

    加药48 h后，收集SN50处理组及对照组细胞，加入细胞裂解液，裂解15 min，冰上裂解30 min，4℃，12 000 r/min离心10 min，吸取上清，-80℃保存备用。每孔上样量为40 μg/20 μL，经SDS-PAGE电泳后转移到PVDF膜上。用封闭液(TBST加5%脱脂奶粉)封闭1 h，加一抗(LC3兔多克隆抗体)，稀释度为1∶1 000，4℃孵育过夜，加入二抗(辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG) ......