巴戟天醇提物对离体大鼠缺血再灌注损伤心肌能量代谢的影响(1)
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[摘要] 目的 探讨巴戟天醇提物对缺血再灌注损伤(IRI)心肌能量代谢的影响。 方法 取健康雄性Wistar大鼠40只，随机均分为空白对照组、IRI组、巴戟天高剂量组和巴戟天低剂量组四组，每组10只，采用Langendorff灌流技术制备心肌IRI模型，2个巴戟天用药组分别在预灌时给予相应浓度的药物。灌流结束后，取各组大鼠左心室组织采用高效液相色谱法检测高能磷酸化合物。 结果 与IRI组相比，巴戟天高剂量组和巴戟天低剂量组三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)、总腺嘌呤核苷酸含量(TAN)及心肌细胞能荷(EC)显著升高(P < 0.05)。 结论 巴戟天醇提物能够改善IRI心肌的能量代谢，可能通过该途径发挥抗心肌IRI作用。
[关键词] 巴戟天醇提物；心肌；缺血再灌注损伤；高能磷酸化合物
[中图分类号] R54 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2012)10(a)-0010-03
心缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury，IRI)是指心肌较长时间缺血造成一定损伤后，恢复血供，不但不能减轻或逆转损伤，反而加重损伤的一种病理生理现象，常见于临床上急性心肌梗死及缺血性心脏病的治疗过程中，主要形成机制包括心肌细胞能量代谢障碍、钙超载、自由基损伤、线粒体功能损伤及心肌细胞凋亡等[1]。巴戟天属于茜草科植物，肉质根可以入药，具有补肾壮阳之功效。以往的研究表明，巴戟天醇提物具有减轻心肌IRI的作用，且这种作用可能与其能够减轻IRI心肌细胞脂质过氧化及细胞凋亡有关[2]。近年来，随着心肌IRI机制的研究进展，有学者发现能量代谢的改变在心肌IRI形成过程可能发挥一定的作用，但巴戟天醇提物对IRI心肌能量代谢的影响尚未见报道。因此，笔者利用Langendorff灌流装置制备离体大鼠心脏IRI模型，探讨巴戟天醇提物对大鼠IRI心肌能量代谢的影响。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 药品与试剂 巴戟天购自广东省德庆县药材公司，一等品，由河南省食品药品检验所鉴定，由所购生药提取得到巴戟天醇提物；三磷酸腺苷(adenosine triphosphate，ATP)、二磷酸腺苷(adenosine diphosphate，ADP)及一磷酸腺苷(adenosine monophosphate，AMP)3种物质的钠盐均购自Amresco公司，批号分别为0614、0340、0712；其他试剂均为国内分析纯。
1.1.2 仪器 Langendorff灌流装置(上海奥尔科特生物科技有限公司)；高效液相色谱仪(SPD-10A紫外检测器、CLASS-VP色谱工作站)(日本岛津公司)；Scienhome C18色谱柱(250 nm×4.6 nm，5 μm)(天津市琛航科技仪器有限公司)。
1.1.3 实验对象 健康雄性Wistar大鼠，体质量265～295 g，平均(278±16)g，购自河南省实验动物中心。
1.2 方法
1.2.1 离体心脏灌流模型的建立 大鼠采取腹腔注射质量分数2%戊巴比妥钠(0.2 μL/g)进行麻醉，同时注射质量分数2%肝素钠(0.1 μL/g)抗凝；开胸取出心脏，置入盛有0～4℃预冷灌流液的器皿中，用灌流液冲洗后，于Langendorff灌流装置上开始进行灌流。灌流压：82 kPa，用Krebs-Hanseleit磷酸缓冲液作为灌流液。其成分(mmol/L)如下：NaCl 118，NaHCO3 25.0，KCl 4.7，KH2PO4 1.2，MgSO4·7H2O 1.2，CaCl2 22.5，Glucose 11.0，pH为7.4，渗透压达到了300 mOsm/L；灌流前用体积分数95% O2+5% CO2混合气体平衡15 min，灌流过程中保持，保持装置内温度处于37℃，并持续通气。
1.2.2 分组及处理 40只Wistar大鼠随机分为空白对照组、IRI组、巴戟天高剂量组和巴戟天低剂量组四组，每组10只大鼠。空白对照组：持续灌流110 min；IRI组：预灌20 min，保持37℃条件下，停灌60 min，再复灌30 min；巴戟天高剂量组和巴戟天低剂量组：分别在预灌时加入浓度为600、300 mg/L巴戟天醇提物，其他处理同IRI组。
1.2.3 高能磷酸化合物的测定 灌流结束后，每只大鼠心脏立即剪取左心室100 mg，采用0.42 mol/L预冷高氯酸制成匀浆，采用1.00 mol/L氢氧化钾进行中和，采用超声波细胞粉碎器粉碎线粒体膜(在冰水中进行)。4 ℃情况下，以10 000 r/min的速度离心10 min；吸取20 μL上清液采用高相液相色谱仪测定各种高能磷酸化合物含量 ......
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