辛伐他汀对缺血再灌注损伤大鼠肾脏的保护作用(1)
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[摘要] 目的 探讨辛伐他汀(Simvastatin)对肾缺血再灌注损伤(IRI)的保护作用。 方法 建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型，随机将动物分为Simvastatin组，缺血再灌注(IR)组，锌原卟啉(ZnPP)组，假手术(sham)组。测定各组大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)的含量，并进行肾组织光镜形态学观察和免疫组化分析血红素加氧酶-1(HO-1)的表达情况。 结果 IR组和ZnPP组BUN、Cr值升高，HO-1的表达少或几乎不表达，肾组织结构紊乱；Simvastatin组除HO-1表达明显增多外，还显著逆转上述改变，组间差异有统计学意义(P < 0.05)。 结论 Simvastatin可上调HO-1的表达，减轻大鼠肾脏的IRI。
[关键词] 辛伐他汀；缺血再灌注损伤；血红素加氧酶-1
[中图分类号] R692 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2012)10(a)-0012-03
肾脏在缺血再灌注(IR)过程中会严重影响其生理功能，如何减轻肾缺血再灌注损伤(IRI)，成为目前研究的热点。细胞在受到应激刺激时，会启动内源性保护机制[1]， HO-1就是其中的一种方式[2]，它可被许多因素诱导而表达[3]。HO-1与IRI密切相关[4]，其分解血红素得到的产物中有重要的自由基清除剂及抗IRI因子[5]。关于他汀类药物的体外实验已经证实该药物能诱导平滑肌细胞中HO-1的表达[6]而发挥血管保护功能。在心、脑等器官的IR过程中，辛伐他汀(Simvastatin)能诱导HO-1高表达减轻其损伤[7-8]。本实验采用肾脏IRI大鼠模型，应用Simvastatin干预，观察其对肾脏IRI组织中HO-1表达以及肾脏组织炎症反应程度的影响，并探讨其可能的机制。
1 材料与方法
1.1 动物选择及分组
健康雄性Wistar大鼠40只，体重(250±20)g。大鼠实验前适应饲养环境7 d后随机分四组：Simvastatin组、IR组、锌原卟啉(ZnPP)组、假手术(sham)组，每组各10只。
1.2 IRI模型制备
Simvastatin组术前给予Simvastatin 10 mg/(kg·d)灌胃7 d；IR组术前给予等体积生理盐水灌胃7 d；ZnPP组术前24 h 给予HO-1抑制剂ZnPP 5 mg/kg腹腔注射；sham组常规饲养。各组末次给药24 h后，全部大鼠经腹腔注射2%戊巴比妥钠40 mg/kg予以麻醉，从腹正中行4 cm纵行切口打开腹腔，仔细分离右肾蒂及肾周筋膜，充分游离右侧肾脏后结扎右肾蒂并切除右肾；同法分离左侧肾脏肾蒂，充分显露左肾动脉及肾脏组织，除sham组外均用动脉夹夹闭左肾蒂45 min，再灌注左肾，观察左肾色泽由暗红色变为鲜红色，表明灌注成功。还纳肠管于腹腔原位并缝合切口，放回原饲养场所待自然清醒并自由饮食。
1.3 标本制备及检测
1.3.1 尿素氮、肌酐水平测定 再灌注24 h后，抽取下腔静脉血样约3 mL，10 000 r/min离心10 min，上清置于-20℃冰箱保存。AU400生化分析仪测量血BUN、Cr水平。
1.3.2 肾脏组织学观察及HO-1免疫组化测定 抽血后处死大鼠取左肾，用于组织学观察的肾组织按照切片制备要求处理并保存，然后按免疫组化三步法制备切片。结果判断：HO-1阳性反应为胞质呈棕黄色颗粒染色，采用病理图像分析软件半定量分析。
1.4 统计学方法
采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差(x±s)表示，三组间比较采用方差分析，组间两两比较采用q检验；以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 各组大鼠血清尿素氮、肌酐水平比较
与sham组比较，另三组大鼠都有不同程度的肾功能损害(P < 0.01)；与IR及ZnPP组相比，Simvastatin组BUN、Cr值明显较低(P < 0.01)；ZnPP组肾功能损伤重于IR组(P < 0.01)。见表1。
2.2 各组大鼠肾脏病理变化的比较
取平展、细胞形态和组织结构清晰的组织切片，依据Paller法[9]可见，ZnPP组肾脏损伤最重，以管型形成、肾间质出血并炎性细胞浸润为主；除sham组外，Simvastatin组肾脏损伤最轻，仅见部分轻度水肿样变性，偶见管型及炎性细胞浸润。与sham组比较，各组肾小管评分均较高(P < 0.05)；与IR组相比，Simvastatin组肾小管评分明显降低(P < 0.05)，表明Simvastatin的应用可减轻大鼠肾组织损伤。见表2。
2.3 各组大鼠HO-1表达水平比较
用半定量分析法，光镜下观察被染成棕褐色细胞的分布情况，无染色为0分，偶有染色为1分，局灶染色为2分，弥漫染色为3分。结果发现，ZnPP组HO-1几乎不表达，假手术组仅有微量表达，IR组呈局灶性表达，Simvastatin组HO-1表达最强。与sham组相比，另外三组HO-1表达差异均有统计学意义(P < 0.05)；Simvastatin组HO-1的表达高于其他组(P < 0 ......
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