寻常型银屑病皮损中磷酸化信号转导和转录激活因子—3与白介素—17的表达及意义(1)
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[摘要] 目的 研究寻常型银屑病皮损中磷酸化信号转导和转录激活因子-3(phosphorylated signal transducer and activator of transcription-3，P-Stat3)与白介素-17(Interleukin-17，IL-17)的表达及意义。 方法 实验组23例，对照组14例。两组均采用免疫组织化学法检测寻常型银屑病皮损组织和正常皮肤组织中P-Stat3与IL-17的表达。 结果 实验组银屑病皮损中P-Stat3和IL-17均高于对照组(Z值分别为-5.043和-4.324，均P < 0.01)，并且与PASI评分呈正相关(分别为rs = 0.713和rs = 0.797，均P < 0.001)，P-Stat3和IL-17呈正相关(rs = 0.762，P < 0.001)。 结论 P-Stat3和IL-17在银屑病皮损中明显升高，且与疾病的严重程度呈正相关。
[关键词] 银屑病；信号转导和转录激活因子-3；白介素-17
[中图分类号] R758.63 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2012)10(a)-0027-03
银屑病是多基因遗传背景下免疫系统异常引起的疾病，目前的研究主要集中在免疫系统和角质形成细胞方面。P-Stat3是信号转导和转录激活因子(signal transducers and activators of transcrip tion，Stat)家族中重要成员——信号转导和转录激活因子-3(Stat3)的活化形式，它通过酪激酶-Stat途径广泛参与细胞的存活、增殖、分化、凋亡、血管发生、转移以及免疫调节等过程。Sano等[1]研究K5. Stat3 C银屑病小鼠模型时，发现真皮上层和表皮层CD4+ T细胞显著增多，并提出Stat3是连接免疫细胞和活化的角质形成细胞间的桥梁。Mathur等[2]在实验中发现Stat3缺陷小鼠的IL-17表达减少，相反，过度持续表达的Stat3能增加IL-17表达。此外，Stat3可直接与IL-17启动子结合诱导IL-17表达。为进一步研究银屑病的发病机制，本研究应用免疫组织化学方法检测银屑病皮损中P-Stat3和IL-17的表达，并分析两者之间的相关性。
1 材料与方法
1.1 材料
实验组皮肤组织取自于2009年1月～2010年4月中山大学附属第一医院皮肤科及黄埔院区皮肤科就诊患者。入选标准：临床及病理均符合银屑病诊断，2个月内未系统用药及1个月内未外用药物，不伴类风湿关节炎、肿瘤、肝肾功能损伤等其他严重疾病以及妊娠、哺乳期妇女。共23例，其中，男16例，女7例；年龄3～60岁，中位年龄31岁；病程1周～13年。并根据皮损面积及严重程度评分(psoriasis area and severity index，PASI)标准[3]记录患者PASI分值。14例正常对照皮肤组织取自于我院整形外科。研究符合并通过医院伦理委员会批准(中山一院论审[2009]110)，检查前签订患者知情同意书。
1.2 试剂
一抗：兔抗人单克隆抗体Phospho-Stat3(Tyr705)购自Cell Signaling Technology公司；鼠抗人IL-17单克隆抗体购自于Satacrutz公司；即用型SP试剂盒购自于北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.3 方法
采用免疫组化ABC法，严格按照说明书操作，IL-17一抗(1∶100)和P-Stat3一抗(1∶50)，用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作阴性对照。
1.4 结果判断
P-Stat3：参照文献[4]，采用半定量计算判断阳性表达结果：阳性细胞百分数≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～75%为2分，>75%为3分；阳性强度呈淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分，两项相乘为强度积分。IL-17：以真皮层血管为中心，在400倍镜下取5个视野计数阳性细胞数。分别由两人独立阅片，差别较大者，取协商的结果。
1.5 统计学方法
采用SPSS 13.0软件进行统计学分析。银屑病皮损及正常对照组的P-Stat3和IL-17的比较用两样本比较的Mannwhitney U秩和检验，两者间的关系采用Spearman相关分析，两者与PASI评分间的关系采用Spearman等级相关性分析。P < 0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
银屑病皮损的PASI评分为2.0～45.3分，中位数为8.4分。
皮肤中P-Stat3、IL-17的表达：寻常型银屑病皮损与正常对照皮肤组织中均有P-Stat3表达(图1、2)，寻常型银屑病皮损P-Stat3阳性表达主要位于表皮棘细胞层的胞核中，少数位于颗粒层和基底细胞层(图1)，正常对照组主要位于基底细胞层的细胞核中(图2)，银屑病皮损IL-17阳性表达主要位于真皮浅层淋巴细胞胞浆中(图3)，而正常对照组皮肤组织中无IL-17的表达(图4)。
与对照组相比，实验组皮损中P-Stat3、IL-17水平升高，差异有高度统计学意义(Z = -5.043、-4.324，均P < 0 ......
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