MS—275体外诱导膀胱癌细胞凋亡的机制探讨(2)
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2.3 MS-275诱导T24细胞凋亡率(AI)的升高
MS-275诱导T24细胞凋亡呈明显的时间依赖性，T24细胞的凋亡率随MS-275作用时间的延长而升高。MS-275作用12、24、48 h的AI分别为(9.52±2.61)%、(17.76±3.75)%和(37.5±5.26)%，AI在MS-275作用12 h以上各组，与对照组比较差异有统计学意义(P < 0.05)。
2.4 MS-275对Bcl-2和Bax表达的影响
MS-275作用6、12 h，T24细胞内Bcl-2蛋白的表达率即出现明显降低，而同时Bax蛋白的表达率出现明显升高(P < 0.05或P < 0.01)；24 h Bax的蛋白表达率逐渐降低(P < 0.01)；此后随着作用时间的延长，Bcl-2的蛋白表达率逐渐升高，而Bax的蛋白表达率逐渐降低，但差异无统计学意义(P > 0.05)。见表1。
3 讨论
诱导肿瘤细胞凋亡是HDAC抑制剂抗肿瘤作用的重要机制之一。本实验用荧光染色法及TUNEL法观察到，微摩尔数量级的MS-275即可诱导T24细胞出现特征性的凋亡形态学改变，并且随作用时间的延长，凋亡细胞的相对数量呈增多趋势。随后的实验对其诱导膀胱癌细胞凋亡的机制进行了初步探讨。
抗肿瘤治疗可诱发肿瘤细胞对细胞内的损伤信号起反应，而细胞是否凋亡很大程度上决定于Bcl-2家族蛋白之间的相互作用[4]。Bcl-2是Bcl-2基因家族中调节细胞凋亡的一个重要分子，能广泛抑制各种凋亡诱导因素引发的凋亡，其很可能影响凋亡最终通路上的中心环节。另一个Bcl-2家族蛋白Bax是重要的异二聚体伴分子，可与Bcl-2构成异二聚体，而Bax自身组成同二聚体。Bcl-2必须结合Bax才能发挥作用。Bcl-2与Bax蛋白量的比率决定异二聚体(Bcl-2/Bax)与同二聚体(Bax/Bax)的比值，这对决定细胞的凋亡易感性起关键作用[5]。本实验的检测结果表明，MS-275作用T24细胞后Bcl-2的表达减弱，Bax的表达增强，说明MS-275可下调Bcl-2表达，上调Bax表达，这与HDAC抑制剂诱导其他恶性肿瘤细胞凋亡时对凋亡相关因子表达的影响相一致[6-7]。本实验还观察到MS-275引起Bax表达的改变较Bcl-2的改变更明显，而由于Bcl-2和Bax表达的改变是同步的，这样就引起Bax/Bcl-2发生更显著的变化。更重要的一点在于，凋亡率发生显著变化之前，Bcl-2和Bax的表达即已发生显著的改变，这更表明Bcl-2和Bax表达的改变是MS-275诱导凋亡的启动环节上的作用因素。
本实验结果表明，HDAC抑制剂MS-275通过诱导膀胱癌T24细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用，Bcl-2和Bax蛋白表达分别下调和上调是其诱导膀胱癌细胞凋亡的机制之一。HDAC抑制剂为膀胱癌的治疗提供了新的思路。
[参考文献]
[1] Ploeg M，Aben KH，Kiemeney LA. The present and future burden of urinary bladder cancer in the world [J]. World J Urol，2009，27：289-293.
[2] Nishioka C，Ikezoe T，Yang J，et al. Simultaneous inhibition of DNA methyltransferase and histone deacetylase induces p53-independent apoptosis via down-regulation of Mcl-1 in acute myelogenous leukemia cells [J]. Leuk Res，2011，35(7)：932-939.
[3] Altmann A，Eisenhut M ......
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