奥曲肽与奥美拉唑联合应用对肝癌H22生长的抑制作用(1)
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[摘要] 目的 观察奥曲肽与奥美拉唑联合应用对肝癌H22生长的抑制作用。 方法 建立小鼠肝癌H22肉瘤移植模型后，随机分为阴性对照组、顺铂组、奥曲肽组、奥美拉唑组和奥曲肽+奥美拉唑组(联合用药组)，给药后计算肿瘤生长抑制率和肿瘤微血管密度的变化。 结果 奥曲肽组与奥美拉唑组的抑瘤率分别为33.5%、29.6%，联合用药组的抑瘤率为37.1%，差异无统计学意义(P > 0.05)。与阴性对照组比较，奥曲肽组与奥美拉唑组能够降低小鼠肝癌H22的微血管密度，差异有统计学意义(P < 0.05)，联合用药降低更加明显，其中奥曲肽组与奥美拉唑组的微血管密度分别为(29.34±8.78)、(40.95±9.23)，联合用药组为(23.89±5.76)。 结论 奥曲肽联合奥美拉唑能够显著抑制肝癌H22的生长，联合用药可能具有协同效果。
[关键词] 奥曲肽；奥美拉唑；肝癌H22；微血管
[中图分类号] R735.7 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2012)12(b)-0034-03
从1889年Stephen Paget提出肿瘤微环境的“种子与土壤”假说至今，研究者认识到肿瘤微环境对于肿瘤的增殖、侵袭、迁移、黏附能力及新生血管的形成具有重要影响[1]，也影响肿瘤细胞对放疗、化疗的敏感性，其中异常的细胞外酸性微环境的诱导和维持，被认为是肿瘤形成和进展的关键环节之一[2]。奥美拉唑能够通过作用质子泵改变肿瘤细胞的酸环境产生抗肿瘤作用[3]。生长抑素类似物奥曲肽和其受体作用发挥抗肿瘤作用，特别是具有很强的肿瘤新生血管生成抑制作用，影响肿瘤组织供血，并且具有逆转肿瘤耐药的作用。而且，奥曲肽和奥美拉唑是临床肿瘤放化疗中常用的治疗和预防性药物，两者作用机制不同，都可以影响肿瘤组织微环境的变化，联合用药是否具有增强抗肿瘤作用呢？因此，本研究拟联合奥曲肽和奥美拉唑共同作用小鼠肝癌H22，初步研究联合用药的抗肿瘤效果。
1 材料与方法
1.1 药物与试剂
奥曲肽(0.1 mg/支，诺华制药)，注射用奥美拉唑钠(40 mg/支，阿斯利康制药有限公司)，顺铂(DDP)注射液(10 mg/支，齐鲁制药)，所有抗体、二抗及显色试剂盒购自武汉博士德试剂公司，其他试剂为分析纯。
1.2 实验动物与瘤株
SPF级ICR雌性小鼠，体质量(20.0±2.0)g，昆明医学院动物实验中心提供，合格证号：滇实动证字第SCXK(滇)2005-008，室温条件下小鼠分笼饲养，自由饮水摄食，过夜；小鼠肝癌H22，本院肝病研究中心提供。
1.3 奥曲肽和奥美拉唑对肝癌H22肿瘤生长的影响
小鼠肝癌H22瘤株，腹腔传代接种。待腹水生长旺盛时，抽出腹水，细胞计数，用生理盐水调整细胞浓度为5.0×106个/mL，于小鼠腋下皮下注射肝癌H22肉瘤细胞悬液0.2 mL/只，接种24 h后随机分组给药。根据小鼠体质量随机分为五组：阴性对照组、顺铂组、奥曲肽组、奥美拉唑组和奥曲肽+奥美拉唑组(联合用药组)，每组10只，给药同时观察小鼠的精神、皮毛光泽度、饮食和活动等一般情况。阴性对照组腹腔注射生理盐水，其他组分别腹腔注射顺铂 1 mg/kg、奥曲肽100 μg/kg、奥美拉唑100 mg/kg，奥曲肽100 μg/kg联合奥美拉唑100 mg/kg，给药1次/d，连续用药9 d，末次给药次日处死小鼠，剥瘤体，称重计算抑瘤率。抑瘤率(%)=(阴性对照组平均瘤质量-给药组平均瘤质量)/阴性对照组平均瘤质量×100%，并通过抑瘤率比较联合用药的疗效。
1.4 免疫组织化学法测量微血管密度
各组小鼠瘤体剥离后，参照试剂盒说明书采用免疫组化SABC法染色血管。切取标本，固定，包埋，切片，经染色后，内皮细胞褐染，血管呈黄褐色。采用Weidner[4]的方法及判断标准进行，计算肿瘤内着色的毛细血管和微小血管，即在低倍视野下选取肿瘤微血管最丰富的区域，然后在400倍视野范围(0.72 mm2)为标准计数被染色的微血管数目，取3个数值的平均值作为微血管密度(micro vessel density，MVD)值。
1.5 统计学方法
应用SPSS 11.5统计软件，计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示，多组间的比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验。计数资料采用χ2检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 奥曲肽和奥美拉唑对肝癌H22肉瘤生长的影响
小鼠接种肿瘤细胞前2 d活动饮食无异常，第3天腋下可触及黄豆大小移植瘤，实验过程中阴性对照组肿瘤生长明显快于其他给药组，且小鼠饮食急剧减少，毛发杂乱无光泽，竖毛现象明显，蜷缩多活动减少。顺铂组表现出明显的化疗副作用，毛发杂乱无光泽，体质生长缓慢瘦小。随着肿瘤的生长和药物的作用，其他组小鼠食欲下降程度、活动减少、体质虚弱、精神不振等表现也不同，同时毛发光泽度出现差异化，实验完毕各组小鼠体质量的变化也不同。实验完毕，阴性对照组小鼠肿瘤平均重量>1 g，说明本实验小鼠肝癌H22肿瘤模型移植成功 ......
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