厄贝沙坦联合瑞舒伐他汀影响冠心病大鼠心肌及主动脉干s分泌型磷脂酶表达的实验研究(1)
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[摘要] 目的 观察厄贝沙坦联合瑞舒伐他汀对冠心病大鼠心肌及主动脉干s分泌型磷脂酶A2-V(sPLA2-V)的影响。 方法 将50只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、厄贝沙坦组、瑞舒伐他汀组及厄贝沙坦联合瑞舒伐他汀组(联合用药组)。采用喂饲高脂饲料和腹腔注射脑垂体后叶素方法制备冠心病大鼠模型。免疫组化及Western blot测定各组大鼠心肌及主动脉干sPLA2-Ⅴ的表达。 结果 模型组大鼠心肌及主动脉干sPLA2-Ⅴ的表达显著高于其他各组(P < 0.05)，联合用药组sPLA2-Ⅴ的表达均显著低于厄贝沙坦组及瑞舒伐他汀组(P < 0.05)。 结论 厄贝沙坦联合瑞舒伐他汀可能通过抑制心肌及主动脉干sPLA2-Ⅴ的表达起到抗动脉粥样硬化治疗冠心病作用，可作为心血管疾病高危人群的一级预防。
[关键词] 冠心病；厄贝沙坦；瑞舒伐他汀；分泌型磷脂酶A2-V
[中图分类号] R541.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2012)12(b)-0036-03
冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)又称缺血性心脏病，是因冠状动脉供血不足，心肌急剧的、暂时的缺血与缺氧所引起的综合征，常引发心绞痛、心肌梗死以致心力衰竭等的临床病症，严重威胁着人们的生命健康。冠心病的病理、生理过程，包括动脉粥样硬化、斑块破裂及局部血栓形成、冠状动脉痉挛等。分泌型磷脂酶A2(type Ⅱ secretory phospholipase A2，sPLA2)属于钙依赖的磷脂酶家族，有研究提示，sPLA2影响了动脉粥样硬化过程， 并在粥样斑块中有高度表达[1]。sPLA2-Ⅴ是sPLA2异构体之一，其在动脉粥样硬化形成中的作用鲜有报道，本研究通过观察厄贝沙坦联合瑞舒伐他汀干预影响冠心病大鼠模型心肌及主动脉干sPLA2-Ⅴ的表达，以分析其在冠心病发病过程中所起的作用。
1 材料与方法
1.1 实验动物
健康雄性Wistar大鼠50只，体质量180～220 g，由武汉大学动物实验中心提供。
1.2 药物及主要试剂
厄贝沙坦(杭州赛诺菲安万特民生制药有限公司，批准文号：J20030113)；瑞舒伐他汀(阿斯利康制药有限公司，批准文号：H20060406)；垂体后叶素注射液(上海第一生化药业有限公司)；胆固醇(天津市博迪化工有限公司生产)；胆酸钠(郑州程达化工产品有限公司)；丙硫氧嘧啶(德国赫尔布兰德大药厂)；sPLA2-Ⅴ抗血清、sPLA2-Ⅴ单克隆抗体及检测试剂盒(Boehringer Mannheim公司)；DAB(武汉子心生物科技有限公司)。
1.3 实验方法
1.3.1 动物分组 50只Wistar大鼠自由饮水进食，饲养于18～22℃的清洁级动物实验室内，正常喂养1周后，随机分为正常组、模型组、厄贝沙坦组、瑞舒伐他汀组及厄贝沙坦联合瑞舒伐他汀组(简称联合用药组)，每组各10只。
1.3.2 动物造模 正常组以普通饲料喂养，其余各组大鼠每日以高脂饲料喂养(含2%胆固醇、10%猪油、0.2%丙基硫氧嘧啶、0.5%胆酸钠、87.3%基础饲料，于末次灌胃前72 h开始，每次灌胃30 min后，腹腔注射垂体后叶素30 U/kg，隔日1次，连续注射3次，建立冠心病心肌缺血模型[2-3]。正常组予以等容量的生理盐水注射。
1.3.3 给药方法 大鼠造模成功后，各组大鼠以相应的药物给药，厄贝沙坦组大鼠以厄贝沙坦50 mg/(kg·d)灌胃；瑞舒伐他汀组大鼠以瑞舒伐他汀10 mg/(kg·d)灌胃；联合用药组予厄贝沙坦50 mg/(kg·d)+瑞舒伐他汀10 mg/(kg·d)灌胃；正常组和模型组予以每日2 mL生理盐水灌胃，均持续12周。
1.4 检测指标
1.4.1 采集标本 给药12周后，各组大鼠禁食12 h，麻醉后迅速开胸剖取心脏和主动脉，于心尖部取适量的左心室心肌组织，将心肌组织和主动脉用预冷0.9%氯化钠注射液冲洗，滤纸吸湿后，放入4%多聚甲醛液中固定。
1.4.2 免疫组化检测sPLA2-Ⅴ的表达 取上述心肌组织和主动脉标本，立即送冰冻切片，厚度10 μm，分别加入1∶100的sPLA2-Ⅴ抗血清及8.8 mg/L的sPLA2-Ⅴ单抗，室温孵育2 h，PBS冲洗DAB显色。sPLA2-Ⅴ阳性细胞呈棕紫蓝色，位于细胞浆内，高倍镜下随机选取5个视野，每个视野观察细胞数不少于200个，按阳性细胞所占百分比及着色深浅进行结果判定[4]，①按照阳性细胞比例评分，1分：<10%，2分：10%～50%，3分：>50%；②按染色强弱评分，0分：阴性；1分：淡黄色染色；2分：中度黄色染色；3分：棕黄色染色。总分=阳性细胞得分×染色强弱得分，总分<3分为阴性 ......
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