藏药经典验方“玛奴西汤”颗粒免疫调节作用的实验研究(1)
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[摘要] 目的 研究藏药“玛奴西汤”颗粒的免疫调节作用。 方法 采用炭粒廓清法和2，4-二硝基氟苯(DNFB)所致的迟发性超敏反应法观察“玛奴西汤”颗粒对小鼠的免疫调节作用。 结果 在炭粒廓清实验中，玛奴高、中、低剂量组的吞噬指数显著提高，与模型组比较，差异有统计学意义(P < 0.05或P < 0.01)；在迟发性超敏实验中，玛奴中、低剂量组的左右耳重量差显著增加，且高于模型组，差异有统计学意义(P < 0.05)。 结论 藏药“玛奴西汤”颗粒具有增强机体免疫功能的作用。
[关键词] 藏药；玛奴西汤颗粒；增强机体免疫功能
[中图分类号] R29 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2012)12(b)-0050-02
“玛奴西汤”(缩写为MNXT)系藏药经典验方，载于藏医名著《四部医典》，至今已有一千多年的临床应用史，由藏木香、悬钩木、宽筋藤和干姜4味药材组成，具有解表、发汗之功效。用于治疗瘟病初期、流感初期、恶寒头痛、关节酸痛、类风湿关节炎、发热等病症[1-2]。但目前临床应用的剂型仍是传统的汤散剂，存在携带不便、生物利用度差等问题，因此本项目为其确定适宜剂型，阐明其有效性及安全性，采用炭粒廓清法和2，4-二硝基氟苯(DNFB)所致的迟发性超敏反应法研究“玛奴西汤”颗粒对免疫功能的影响，为藏药“玛奴西汤”颗粒在临床中的应用提供依据。
1 仪器与试剂
1.1 实验仪器
秒表，粤字03000122，飞亚运集团；紫外光栅分光光度计，型号：752，上海精密科学仪器有限公司；电子天平，型号：JD1060-2，沈阳龙腾电子称量仪器有限公司。
1.2 实验试剂
玛奴西汤颗粒，规格：30 g/袋，生产批号：20111212，由青海省藏医药研究院基础研究所传统工艺室提供；醋酸泼尼松片，规格：5 mg/片，生产批号：12020102，天津天药药业股份有限公司；生理盐水，生产批号：H11021313，四川科伦药业股份有限公司；羧甲基纤维素钠，生产批号：20080399，常州市武进庙桥第二化工有限公司；2，4-二硝基氟苯，生产批号：20070519，成都市科龙化工试剂厂；丙酮，生产批号：2006年4月26日，天津市化学试剂六厂；硫化钠，生产批号：060320，成都金山化学试剂有限公司生产；碳酸钠，生产批号：030211，西安化学试剂厂；印度墨汁，生产批号：NBLD2012Y0518，北京诺博莱德科技有限公司；微量采血管，生产批号：201204，姜堰市健化医疗器械有限公司；静脉血样采集容器普通管，规格：5 mL，生产批号：120226，湖南省浏阳市医用仪具厂。
1.3 实验动物
昆明种小鼠，清洁级，体重18～22 g，合格证号：青医动字号20120007，购于青海省实验动物中心。
2 方法与结果
2.1 实验方法
2.1.1 炭粒廓清法[3-4] 取18～22 g雄性小鼠60只，随机分为空白组、模型组、醋酸泼尼松组(10.0 mg/kg)、玛奴高剂量组(2.0 g/kg)、玛奴中剂量组(1.0 g/kg)、玛奴低剂量组(0.5 g/kg)，每组10只。每组小鼠每日灌胃给药1次，连续给药7 d，给药量按小鼠体重折算，空白组和模型组给予蒸馏水。末次给药前禁食16 h，每组小鼠于末次给药后1 h于尾静脉注入用1%明胶溶液稀释4倍的印度墨汁(0.01 mL/g体重)。于注入墨汁后2 min及12 min用微量采血管从小鼠眼眶后静脉丛取血20 μL，立即吹入装有2 mL，0.1% Na2CO3溶液的血液采集管中，并立即摇匀。以空白组血容液校零，用752型分光光度计在680 nm处测定吸光度A。后将小鼠颈椎处死，取脾脏、肝脏称重。并计算廓清指数：K=(lgA1-lgA2)/(t2-t1)(A1为2 min时血样的吸光度，A2为12 min时血样的吸光度，t1为第1次采血时间，单位为min，t2为第2次采血时间，单位为min)；吞噬指数：a=体重 × K1/3/(脾重+肝重)(K为廓清指数)。
2.1.2 迟发性超敏反应[4] 取18～22 g小鼠60只，雌雄各半，分组与给药方法同“2.1.1”。于给药1 d后，每只小鼠用7%的硫化钠溶液涂抹腹部脱毛[5]，并在24 h后将5% 2，4-二硝基氟苯丙酮溶液50 μL均匀涂抹于小鼠腹部脱毛处致敏，继续给药7 d。末次给药前禁食不禁水16 h，每组小鼠于末次给药后1 h，于小鼠左耳两面均匀涂抹20 μL，1%2，4-二硝基氟苯丙酮溶液进行攻击，24 h后将小鼠颈椎处死，剪下小鼠左右两耳，用直径为7 mm的打孔器于小鼠左右两耳片同部位等面积铳下耳片，用精密电子天平称重，计算小鼠肿胀度(左右耳片重量差)。
2.1.3 统计学方法 采用统计软件SPSS 12.0对实验数据进行分析，计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示，采用单因素方差分析，组间比较采用LSD-t检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。
2.2 实验结果
2.2.1 玛奴西汤颗粒对小鼠廓清指数和吞噬指数的影响 连续给药7 d后，玛奴中剂量组的廓清指数和吞噬指数显著提高，与模型组比较，差异有统计学意义(P < 0.05或P < 0.01)；并且高、低剂量组的吞噬指数显著提高 ......
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