丁酸钠对重症急性胰腺炎大鼠(1)
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[摘要] 目的 探讨丁酸钠(NaB)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的影响。 方法 30只SD大鼠分成对照组、SAP组及NaB治疗组，每组各10只，采用牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射制作SAP动物模型，NaB治疗组为SAP制模5 min后通过股静脉注射NaB(5 mg/kg)。检测血清淀粉酶、胰腺湿干重比值，利用Kusske方法对胰腺组织的病理学改变：水肿、出血、坏死、炎细胞浸润进行计分，TUNEL法检测胰腺腺泡细胞凋亡。 结果 SAP组血清淀粉酶与对照组比较明显升高，差异有高度统计学意义(P < 0.01)，NaB治疗组血清淀粉酶较SAP组明显下降，差异有统计学意义(P < 0.05)；SAP组胰腺组织湿/干重比值较对照组下降，差异有高度统计学意义(P < 0.01)，NaB治疗组胰腺组织湿/干重比值较SAP组明显下降，差异有统计学意义(P < 0.05)。SAP组胰腺损伤积分明显高于对照组，差异有高度统计学意义(P < 0.01)，NaB治疗组胰腺损伤积分明显低于SAP组，差异有统计学意义(P < 0.05)。SAP组胰腺腺泡细胞凋亡指数高于对照组，差异有高度统计学意义(P < 0.01)，NaB治疗组胰腺腺泡细胞凋亡指数显著高于SAP组，差异有统计学意义(P < 0.05)。 结论 NaB可以促进SAP大鼠胰腺腺泡细胞凋亡，减轻中性粒细胞活化，降低SAP严重程度。
[关键词] 丁酸钠；重症急性胰腺炎；细胞凋亡
[中图分类号] R576 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2012)12(c)-0028-03
重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)的死亡率及并发症发生率一直较高，治疗效果无法令人满意。有证据表明，细胞凋亡与SAP密切相关，在胰腺炎的发病机制中被认为是一种保护现象，SAP的严重程度与胰腺细胞凋亡呈负相关[1]。丁酸钠(sodium butyrate，NaB)能够诱导肿瘤细胞和多种非肿瘤细胞的凋亡，但NaB诱导胰腺腺泡细胞以及NaB对SAP及其并发症的治疗作用方面的研究较少，本研究通过建立SAP动物模型，探讨NaB对动物SAP及其并发症的治疗作用，为今后NaB应用于SAP的临床治疗提供实验依据和理论基础。
1 材料与方法
1.1 药品及试剂
NaB及牛磺胆酸钠剂购自美国Sigma公司，试剂纯级，加蒸馏水配制成5%的溶液备用；血清淀粉酶试剂盒(北京科美生物技术有限公司)；TUNEL试剂盒(美国Promega)；SP法免疫组化试剂盒(福州迈新)。
1.2 动物分组及模型制备
健康雄性SD大鼠(吉林大学实验动物中心提供)30只，体重200～250 g，随机分为对照组、SAP组、NaB治疗组，每组各10只。参照Aho等[2]的方法并稍加改进制备SAP动物模型。实验前12 h开始禁食，自由饮水，10%水合氯醛(3 mL/kg)腹腔注射麻醉，上腹正中切口进入腹腔，在肝十二指肠韧带右缘找到胆总管，在手术显微镜下用4号头皮静脉针于十二指肠乳头附近经十二指肠壁穿刺，刺入后用手指捏闭胆总管末端。用微量注射泵向胰胆管内恒速注入5%牛磺胆酸钠(2.0 mL/kg)，注射完5 min后拔出针头，双层缝合腹壁。NaB治疗组操作过程同上，即制作另一组大鼠SAP模型，成功后5 min通过股静脉注射NaB 5 mg/kg。对照组仅在开腹后轻轻翻动胰腺。造模后24 h在麻醉下切开腹腔，肉眼观察胰腺、胰周等腹内器官病变情况，腹主动脉采血，静置后离心，留取血清-20℃保存待测淀粉酶，取大鼠部分胰腺组织用中性福尔马林固定，石蜡包埋，用于胰腺组织常规病理学检查、免疫组化和细胞凋亡的检测，其余胰腺组织进行湿/干重比值的测定，最后处死动物。
1.3 检测指标及方法
1.3.1 血清淀粉酶检测 使用临床全自动生化分析仪测定。
1.3.2 胰腺组织湿/干重比值测定 各组大鼠24 h处死后，切取的胰腺组织于电子天平上称重获得湿质量；再将胰腺组织于60℃烘干24 h，至质量不变为止获得干质量，计算湿/干重比值。
1.3.3 胰腺组织病理学观察 切取各组大鼠胰腺组织用10%福尔马林液固定，常规制作病理HE切片。光镜下观察胰腺组织病理学改变，参照Kusske等[3]的方法对胰腺损伤进行计分。①水肿：0＝无；1＝轻度叶间隙增宽；2＝重度叶间隙增宽；3＝腺泡间隙增宽；4＝细胞间隙增宽。②坏死：0＝无；1＝坏死面积1%～10%；2＝坏死面积11%～20%；3＝坏死面积21%～30%；4＝坏死面积> 30%。③出血：0＝无；1＝有。④炎性细胞浸润：计数高倍视野下血管周围或小叶内白细胞数量，0＝0～1个；1＝2～10个；2＝11～20个；3＝21～30个；4＝ > 30个或出现微脓肿。胰腺损伤积分= ①+②+③+④。
1.3.4 胰腺腺泡细胞凋亡检测 TUNEL法检测胰腺组织腺泡细胞凋亡，胰腺组织常规石蜡包埋切片，严格按照说明书操作。细胞核中有出现棕黄色颗粒者为阳性细胞，即凋亡的胰腺腺泡细胞。每张切片染色阳性区域随机选取5个高倍视野(400×)，计算500个腺泡细胞中阳性细胞所占的百分比，即为凋亡指数(apoptosis index ......
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