非发酵菌的耐药性及产超广谱β—内酰胺酶(1)
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[摘要] 目的 了解非发酵菌的耐药性及产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和碳青霉烯酶的情况，以期为临床合理应用抗菌药物提供依据。 方法 应用VITEK-2全自动微生物分析系统对临床分离非发酵菌进行鉴定。按照美国临床实验室标准化委员会(CLSL/NCCLS 2010版)推荐的纸片扩散法检测156株非发酵菌对常见的15种抗生素耐药情况；按照NCCLS推荐的确认试验(双纸片增效试验)检测菌株产ESBLs情况；采用两种改良Hodge试验进行碳青霉烯酶表型确证。 结果 临床分离的156株非发酵菌前3位为鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌，均呈现高耐药率。鲍曼不动杆菌产ESBLs率为27.6%，铜绿假单胞菌产ESBLs率为37.5%。鲍曼不动杆菌产碳青霉烯酶率为50.0%，铜绿假单胞菌产碳青霉烯酶率为13.3%。两种改良Hodge试验检测鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶的一致性较好，检测铜绿假单胞菌碳青霉烯酶的一致性一般，但是无不确定结果。 结论 非发酵菌耐药率较高，产ESBLs和碳青霉烯酶情况已相当严重，检测碳青霉烯酶阳性的铜绿假单胞菌时，PAE-MHT(以肺炎克雷伯菌ATCC 700603作为指示菌的改良Hodge试验)优于MHT(以大肠埃希菌ATCC 25922作为指示菌的改良Hodge试验)。
[关键词] 非发酵菌；超广谱β内酰胺酶；碳青霉烯酶；改良Hodge试验
[中图分类号] R378 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2012)12(c)-0109-04
非发酵菌是指一群不发酵糖类或仅以氧化形式利用葡萄糖、需氧或兼性厌氧的无芽胞革兰阴性杆菌，包括不动杆菌属、假单胞菌属、伯克霍尔德菌属等在内的9个属近百种细菌。近年来，由于各种广谱抗菌药物、化学治疗、放射治疗、侵袭性操作的开展及免疫抑制剂的应用，使非发酵菌已成为机会感染与医院感染的主要致病菌，尤其是铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌。并且这些菌株往往表现为多重耐药，给临床治疗造成了极大的困难。产β-内酰胺酶(ESBLs)是革兰阴性杆菌最重要的耐药机制，其中以产ESBLs和碳青霉烯酶最具有临床意义。本研究对2011年6月～2012年6月怀化市第三人民医院156株非发酵菌进行耐药性及产ESBLs和碳青霉烯酶分析，旨在为临床合理使用抗菌药物、降低医院感染发生率、预防和控制非发酵菌感染提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 菌株来源
收集怀化市第三人民医院2011年6月～2012年6月各临床科室送检的微生物标本中分离的非发酵菌156株，同一患者无重复标本。
1.2 主要试剂与仪器
美罗培南(MEM)、亚胺培南(IPM)、哌拉西林/他唑巴坦(PIP/TZ)、头孢吡肟(FEP)、头孢他啶(CAZ)、头孢噻肟(CTX)、头孢哌酮/舒巴坦(CFP/SU)、阿米卡星(AK)、环丙沙星(CIP)、氨曲南(ATM)、庆大霉素(GM)、妥布霉素(TPM)、复方新诺明(SXT)、氨苄西林(AMP)、左旋氧氟沙星(LEV)、头孢噻肟/棒酸(CD03，30/10 μg)、头孢他啶/棒酸(CD02，30/10 μg)，均为英国OXO ID公司产品；M-H培养基干粉，由杭州天和微生物试剂有限公司提供；VITEK-2全自动微生物分析仪及与其配套的GN革兰阴性杆菌鉴定卡和YST GN13药敏试验卡，由法国生物梅里埃公司提供。
1.3 质控菌株
大肠埃希菌ATCC 25922、铜绿假单胞菌ATCC 27853、肺炎克雷伯ATCC 700603、肺炎克雷伯菌ATCC BAA-1705、肺炎克雷伯菌ATCC BAA-1706，均购自卫生部临床检验中心。
1.4 细菌的分离培养、鉴定
按《全国临床检验操作规程》(第3版)进行细菌的分离培养和常规鉴定，采用Vitek-2微生物分析系统进行鉴定。
1.5 药物敏感性试验
根据美国临床实验室标准化委员会(CLSL/NCCLS 2010版)标准采用纸片扩散法(K-B法)检测常见非发酵菌对15种抗生素(IPM、MEM、PIP/TZ、FEP、CAZ)、CTX、CFP/SU、AK、CIP、ATM、GM、TPM、SXT、AMP、LEV)的耐药性。将大肠埃希菌 ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853作为药敏试验质控菌株。结果判断参照NCCLS 2010年判断标准。
1.6 β-内酰胺酶检测
初筛试验(CAZ≤22 mm，CTX ≤27 mm，ATM ≤27 mm，FEP ≤22 mm)为阳性的铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌按NCCLS确认试验检测(纸片增效试验)，即CTX(30 μg)，CTX/CLV(CD03，30/10 μg)与CAZ(30 μg)，CAZ/CLV(CD02，30/10 μg)，任意一对含酶抑制剂纸片抑菌圈直径增加≥5 mm为ESBLs阳性 ......
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