大孔吸附树脂分离富集九节茶浸膏中迷迭香酸的研究(2)
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参见附件。
由表2、3可知，XAD-4、XAD-16树脂吸附能力要大于其他各类，但是其解吸附效果并不比其他树脂好，综合考虑效果和价格，因此选择吸附和解析效果较好的HPD-400树脂；HPD-400比HPD-600、HPD-824吸附能力稍强，解吸附能力跟其他没有明显差别。因此，选用HPD-400树脂对迷迭香酸的分离富集工艺进行研究。
2.4 动态实验
2.4.1 上样液溶度对树脂吸附性能的影响 大孔吸附树脂主要通过表面吸附、表面电性或氢键等作用，具有一定吸附容量。当达到吸附饱和时，此时其中成分即泄漏流出，故需考察树脂的泄漏点，来确定上柱的最佳药量。分别称取九节茶浸膏适量，按照1∶5、1∶10、1∶20的比例加水，超声搅拌溶解，离心(3 600 r/min，15 min)取上清液备用。分别取HPD-400树脂40 mL 3份，置柱中，处理好后，用上述3种不同溶度的样液以2BV/h的速度上样，每1BV收集1份，检测其中迷迭香酸的含量。当出现泄漏时即停止收集。泄漏曲线见图3。
由图3可知，1∶5样液上样后第3份出现泄漏；1∶10样液上样后第5、9份出现泄漏。按树脂动态吸附浓度=泄漏点前上柱体积×样液中有效成分含量/树脂体积，得树脂的动态吸附容量分别为2.76、3.56、2.23 mg/mL。可见样液浓度过低或者过高都不利于吸附的进行。
2.4.2 吸附终点考察 由于过量水洗不仅将极性较大杂质成分去除，同时也将部分迷迭香酸解吸下来，因此本实验包括两部分：水洗终点的判断及醇洗终点的判断。
水洗终点判断：取HPD-400树脂40 mL置柱中，以4BV的样液上样，控制上样流速为2BV/h，上样结束后以同样的流速水洗，每1BV收集1份，分别检测水洗液中迷迭香酸含量，收集液经浓缩，低温真空干燥，得干膏中迷迭香酸的质量分数，见表4。结果表明，随着水洗量增大，则有效成分被洗脱下来的量也越多。第2份收集液的干膏量已明显低于第1份，即1BV的水即可将大部分的水溶性杂质与大部分目标成分迷迭香酸分离，故确定洗脱剂水的最佳用量为1BV。
洗脱溶剂及醇洗终点判断：根据上述优化后条件进行上样、水洗处理后，用50%、60%、70%乙醇分别洗脱，每1BV收集1份洗脱液，共收集6份，按照“2.1.1”项下方法测定迷迭香酸含量。累积洗脱百分比=洗脱液中迷迭香酸的量/样液中迷迭香酸的量，结果见表5及图4。
根据表5结果，50%乙醇洗脱溶剂取前4份洗脱液，60%、70%乙醇洗脱液选择前3份洗脱液分别浓缩，低温真空干燥，得干膏。根据溶剂用量，出膏量、干膏中迷迭香酸的质量分数、转移率及除杂率为指标，确定洗脱溶剂。结果见表6。结果表明，三种溶剂洗脱的迷迭香酸转移率[转移率=洗脱液中迷迭香酸的含量×洗脱体积/(样液中迷迭香酸的含量×上样体积)]相差不大，但70%乙醇洗脱的除杂效果最好[除杂率=1-(洗脱液浓缩所得干膏量/原九节茶浸膏量)]，且溶剂用量最少。综合考虑选用70%乙醇，作为洗脱溶剂。
2.4.3 最佳洗脱流速考察 量取HPD-400大孔吸附树脂3份，每份40 mL，按照上述考察优化后的条件进行上样、水洗，最后用70%乙醇分别以1BV/h、2BV/h、4BV/h不同洗脱流速下进行洗脱，每1BV收集1份洗脱液，共收集6份，按照“2.1.1”项下方法测定迷迭香酸含量。结果见图5。不同流速洗脱都需要3BV的洗脱液才能将有效成分洗脱完全。
根据图5结果，不同洗脱速度下分别将前3份收集液进行低温真空干燥，得干膏。根据出膏量、干膏中迷迭香酸的质量分数及干膏除杂率为指标，确定洗脱流速。结果见表7。综上所得，以2BV/h所得干膏最少，除杂效果最佳，且迷迭香酸的含量也最高。因此选择2BV/h作为最佳洗脱速度。
2.5 最佳工艺的确定及验证
按照上述所确定的最佳吸附和解析条件，取样品液进行上柱、吸附、洗脱。洗脱液经浓缩回收乙醇后，低温干燥，得干膏。重复3次，产品经分析其迷迭香酸的质量分数平均为4.57%，较原九节茶浸膏的0.87%含量，提高了5.2倍；过柱后出膏量平均2.6 g占原16 g浸膏的16.3%，即过柱除杂率平均为83.70%；经计算出迷迭香酸过柱转移率平均为88.70%。见表8。
2.6 树脂重复使用周期考察
树脂再生方法：每次洗脱结束后，用95%乙醇洗至流出液无色，然后加水洗至无醇味；加1 mol/L HCl，浸泡30 min，淋洗至无色，加水洗至中性；接着加1 mol/L NaOH，浸泡30 min，淋洗至无色，加水洗至中性。
取新的HPD-400大孔吸附树脂，根据上述的最佳吸附及洗脱条件，在同一根树脂柱上进行上样与洗脱。每次洗脱结束后按照上述再生方法再生，再上样洗脱，反复上样洗脱5次。对迷迭香酸的转移率为72.07%～76.34%，平均迷迭香酸的转移率达到73.06%。新树脂对迷迭香酸的转移率为86.68%，经再生后树脂的对迷迭香酸的富集能力比新树脂有所下降，但其后树脂的能力变化不大，比较稳定。根据“大孔吸附树脂分离纯化技术专题讨论会会议”上提出的分离同一物质树脂吸附能力下降30%即不能再重复利用的标准，该树脂可以再生重复使用。
3 讨论
3.1 树脂的吸附能力
应用大孔吸附树脂分离纯化中药有效成分，是利用其吸附的可逆性及其多孔网状结构的筛选性 ......
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