菊花、金银花浸膏的提取工艺研究
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[摘要] 目的 对菊花、金银花浸膏的提取工艺进行研究。 方法 采用正交试验法进行优选，以收率和绿原酸含量作为评价指标。 结果 最佳工艺为：微沸提取2次，第1次加9倍水，第2次加7倍水，每次2 h，醇沉浓度为63%。 结论 优选得到的工艺稳定可靠。
[关键词] 菊花、金银花浸膏；提取工艺；正交设计
[中图分类号] R284.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2012)12(c)-0132-02
菊花为菊科植物菊(Chrysanthemum morifolium Ramat.)的干燥头状花序。金银花为忍冬科植物忍冬(Lonicera japonica Thunb.)的干燥花蕾或带初开的花[1]。菊花和金银花皆为国家批准的既是食品又是药品的物品，皆含有具有抗菌、抗病毒作用的绿原酸，两者均有清热解毒的功效[2]，在我国传统食品如龟苓膏、凉茶中常常组合使用。据文献报道，绿原酸具有多种生物活性，绿原酸可调节淋巴细胞分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)和干扰素(INF-α)， 发挥免疫调节作用[3]，绿原酸具有抗菌、抗病毒、抗氧化的作用[4-5]，对多种疾病的预防和治疗具有作用，应用前景较好[6]。
菊花、金银花为本公司开发的新产品菊花龟苓膏中的主要组成成分，现对菊花金银花浸膏的提取工艺进行研究，参考相关文献，采用正交试验法[7-8]，为菊花龟苓膏的生产提供科学依据。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
Agilent 1200高效液相色谱仪，DAD检测器，自动进样器。
1.2 试药
绿原酸对照品(批号：110756-200110，中国药品生物制品检定所提供)，流动相用甲醇为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。菊花、金银花均经我公司食品质量部鉴定，菊花为菊科植物菊(Chrysanthemum morifolium Ramat.)的干燥头状花序；金银花为忍冬科植物忍冬(Lonicera japonica Thunb.)的干燥花蕾或带初开的花。
2 方法与结果
2.1 菊花金银花浸膏制备方法
采用传统水提法，水提法是提取绿原酸较好的方法[9]。本实验采用3因素3水平正交实验设计，因素A提取时间分别为1、1.5、2 h；因素B提取次数分别为1、2、3次；因素C醇沉浓度分别为63%、70%、75%。取同批菊花金银花药材9份，每份50 g，按表1设计进行试验，第1次加药材量9倍水，第2次加药材量7倍水，第3次加药材量7倍水，合并提取液，过滤，浓缩至相对密度为1.05，醇沉，取上清液过滤，上清液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.25，备用。
2.2 绿原酸含量测定方法[10]
2.2.1 绿原酸标准储备液(2.00 mg/mL) 称取绿原酸标准品0.02 g(精确至0.000 1 g)置于10.0 mL容量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，混匀(此标准储备液在4℃冰箱中，可保存5 d)。
2.2.2 绿原酸标准使用液(200 μg/mL) 准确量取1.00 mL绿原酸标准储备液于10.0 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，混匀(此标准使用液在4℃冰箱中，可保存5 d)。
2.2.3 试样处理 称取2 g菊花金银花浸膏(精确到0.001 g)于25.0 mL容量瓶中，加入20 mL 70%甲醇，超声提取30 min，用70%甲醇定容至刻度，混匀，过0.45 μm滤膜，滤液供色谱分析。
2.2.4 标准曲线的制备 分别吸取绿原酸标准使用液，用流动相在容量瓶中稀释成浓度分别为2.0、10.0、20.0、40.0、80.0 μg/mL的标准系列。
2.2.5 液相色谱条件 色谱条件：Diamonsil C18色谱柱(5 μm，4.0 mm×250 mm)；流动相：乙腈-0.5%乙酸溶液(10∶90)；流速：1.0 mL/min；检测波长：327 nm；柱温：30℃；进样量：10 μL。
2.2.6 色谱分析 取标准溶液和试样溶液注入色谱柱中，以保留时间定性，以试样峰面积与标准比较定量。
2.3 正交试验
2.3.1 因素与水平 选择提取时间(A)、提取次数(B)、醇沉浓度(C)3个因素，设计3个水平，选用L9(34)正交表。因素水平见表1。
2.3.2 结果分析 见表2～4。
从表2可见，在实验水平范围内，收率较佳的工艺为A3B3C2，绿原酸含量较佳的工艺为A3B2C1。表3、4的方差分析结果表明，A、B、C因素对收率的影响都不显著；A因素对绿原酸含量的影响较大(P < 0.05)，B、C因素对绿原酸含量的影响不显著。综合分析结果，主要考虑绿原酸含量，确定此方法的提取工艺为微沸提取2次，第1次加9倍水，第2次加7倍水，每次2 h，醇沉浓度为63%。
2.4 最佳工艺验证
按照上述优化工艺，平行提取3份，分别测定收率和绿原酸的含量，收率分别为9.45%、9.65%、9.53%，平均收率为9.54%；绿原酸含量分别为10.33%、9.89%、11.92%，平均含量为10.71%。结果表明，筛选出来的工艺稳定可行。
3 讨论
3.1 提取时间的选择
分析结果表明，提取时间对菊花金银花中绿原酸的含量有显著影响，但是菊花金银花在加水提取的过程中容易变软，提取过长，药渣会严重堵塞管道，影响提取液从管道流出。本次选定的提取时间为每次2 h，基本不影响提取液的流出，在实际生产中要根据设备管道的大小再进行调整。
3.2 醇沉浓度的选择
醇沉浓度对本次提取来说不是显著因素，但是在实际操作过程中发现，醇沉浓度低于63%时醇沉的液和渣分离不彻底，大大影响提取效率，醇沉浓度为63%时，醇沉效果已经较好，绿原酸的含量也较高，不需要再提高醇沉浓度。
菊花金银花浸膏提取精制后作为菊花龟苓膏的主剂，具有两方面的技术优势：②菊花金银花浸膏经过精制后为均匀的中间产品，对保证龟苓膏成品的稳定性及优良的口感发挥重要作用。②菊花金银花提取精制后投料，保证投料准确性及便捷性。
[参考文献]
[1] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：205-206 ......
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