HPLC法测定维A酸的平衡溶解度及表观油水分配系数(1)
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[摘要] 目的 建立HPLC法，模拟人体皮肤环境，测定维A酸在水、正辛醇中的平衡溶解度，以及在正辛醇-缓冲液体系中的表观油水分配系数。 方法 采用HPLC法测定维A酸的浓度，采用摇瓶法测定维A酸的表观油水分配系数。 结果 在32℃下，pH为5.8时，测得维A酸在正辛醇中的溶解度为6.25 mg/mL，在水中的溶解度小于0.1 mg/mL，维A酸的表观油水分配系数为36 079.8(lgP=4.55)。 结论 本文建立的HPLC法，可用于维A酸溶解度及油水分配系数的测定，该方法简便、准确。
[关键词] 维A酸；HPLC；平衡溶解度；表观油水分配系数
[中图分类号] R927 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2013)01(b)-0099-03
维A酸又称维甲酸、视黄酸[1-2]，是维生素A的活性代谢中间产物[3]。维A酸为多烯酸结构的化合物，在光的影响下，易发生异构化反应，迅速转化为异维A酸[4-5]。维A酸可影响骨的生长和上皮代谢，能促进上皮细胞增殖分化和角质溶解[6]，亦起到抑制肿瘤、治疗痤疮和银屑病等作用[7-8]，目前已应用于临床，但关于维A酸的溶解度及油水分配系数的研究，国内外均鲜有报道。本文建立HPLC法，模拟人体皮肤环境，在32℃下，pH为5.8时测定了平衡溶解度及油水分配系数，为维A酸剂型的研究提供参考。
1 仪器与试剂
LC-10ATvp岛津高效液相色谱仪；HW-2000色谱数据处理系统；BT 125D电子分析天平；SK2510HP超声波清洗器；THZ-22台式恒温振荡器。
维A酸原料药(东北制药集团股份有限公司，批号：0311 203001)；维A酸对照品(美国SIGMA公司，批号：J1F266)。
甲醇为色谱纯；冰醋酸、正辛醇为分析纯；水为去离子水。
2 方法及结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取维A酸对照品12.5 mg，置50 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为维A酸对照品储备液。精密吸取对照品储备液2 mL，置50 mL棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
2.1.2 供试品溶液的制备 精密称取维A酸供试品12.5 mg，置50 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为维A酸供试品储备液。精密吸取供试品储备液2 mL，置50 mL棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.2 色谱条件及系统适用性试验
2.2.1 流动相的选择 《英国药典》“维A酸”流动相条件为：甲醇-水-冰醋酸(770∶225∶5)；《美国药典》“维A酸”流动相条件为：异辛烷-异丙醇-冰醋酸(99.65∶0.25∶0.1)；《中国药典》2010年版“维A酸”流动相条件为：甲醇-2%冰醋酸溶液(81∶19)。综合3种条件，以《中国药典》2010年版“维A酸”流动相为起始条件，进行试验，并在此基础上优化。结果见表1。
2.2.2 色谱条件的确定 以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，甲醇-水-冰醋酸(90∶10∶0.4)为流动相，检测波长为355 nm；流速为1.0 mL/min，柱温为40℃，进样量为20 μL。
在此色谱条件下，取适当浓度的维A酸对照品及供试品溶液20 μL注入液相色谱仪，理论塔板数按维A酸峰计不低于9 000，维A酸保留时间为13.4 min，拖尾因子为1.01，其杂质对主峰测定无干扰。结果见图1。
2.3 线性关系考察
称取维A酸对照品20 mg，精密称定，置于50 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取上述溶液1、2、3、4、5 mL置于100 mL棕色量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取上述溶液20 μL，注入液相色谱仪，以峰面积(A)对浓度(C)作线性回归，考察线性关系，并求得标准曲线方程。标准曲线方程Y=91 399X+18 088，r = 0.999 8(n = 5)。结果表明，在4.04～20.20 μg/mL的浓度范围内，峰面积与浓度的线性关系良好。
2.4 精密度试验
按“2.1.2”项下配制6份浓度为10 μg/mL的维A酸供试品溶液，平行进样6次，计算6份溶液的RSD值。结果表明，6份样品的RSD值为0.64%，说明本方法精密度好。
2.5 准确度试验
按“2.1.2”项下配制低、中、高3个浓度的维A酸供试品，溶液浓度分别为8、10、12 μg/mL。精密吸取供试品溶液，及“2.1.1”项下的对照品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。以外标法计算供试品溶液中维A酸含量，并计算回收率。高、中、低3种浓度的准确度均好。结果见表2。
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