巴戟天醇提物对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用(1)
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[摘要] 目的 探讨巴戟天醇提物对肾缺血再灌注损伤(IRI)的保护作用。 方法 将80只健康雄性Wistar大鼠随机均分为假手术组、IRI模型组、巴戟天高剂量组和巴戟天低剂量组4组，每组各20只。巴戟天高、低剂量组大鼠均连续灌胃给予一定浓度的巴戟天醇提物，而假手术组和IRI模型组大鼠仅给予生理盐水灌胃，用药7 d后，建立肾IRI模型。采用生物化学法检测血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)水平以及肾组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平，采用TUNEL法检测肾组织细胞凋亡情况。 结果 与IRI模型组相比，巴戟天高剂量组和巴戟天低剂量组血清BUN、Cr水平降低(P < 0.05)；巴戟天高剂量组和巴戟天低剂量组肾组织中SOD、GSH-Px水平升高，而MDA水平降低(P < 0.05)；巴戟天高剂量组和巴戟天低剂量组凋亡指数降低(P < 0.05)。巴戟天高剂量组和巴戟天低剂量组血清BUN、Cr水平，肾组织中SOD、GSH-Px水平，凋亡指数比较差异均有统计学意义(均P < 0.05)。 结论 巴戟天醇提物能够保护肾IRI后的肾组织，这可能与其具有抗氧化和抗凋亡作用有关。
[关键词] 巴戟天醇提物；肾；缺血再灌注损伤；尿素氮；肌酐；超氧化物歧化酶；谷胱甘肽过氧化物酶；丙二醛；细胞凋亡
[中图分类号] R692 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2013)02(b)-0022-03
严重肾挫伤、复杂肾手术等处理过程中容易引发肾缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury，IRI)，严重者可能会导致肾衰竭，因此，在进行肾手术治疗的同时，保护肾组织免受损伤成为了目前临床中的研究热点[1]。以往多采用缺血预适应的方法防治手术引发的肾IRI。近年来，随着减轻缺血再灌注损伤药物的研究进展，人们逐渐倾向于应用更为简单的药物预适应的方法防治IRI。双子叶植物茜草科植物巴戟天最早应用于阳痿早泄、月经不调等疾病的治疗。研究表明，巴戟天醇提物能够保护IRI心肌组织，且能够延缓大鼠的衰老[2-3]。本研究旨在通过观察巴戟天醇提物对大鼠肾IRI后血清尿素氮(urea nitrogen，BUN)、肌酐(creatinine，Cr)水平、肾组织超氧化物歧化酶(superoxidase，SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)水平，肾细胞凋亡情况的变化，进而探讨巴戟天醇提物对肾IRI的保护作用。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
巴戟天醇提物提取自巴戟天(一等品，广东省德庆县药材公司，河南省食品药品检验所鉴定)；SOD、GSH-Px、MDA、考马斯亮兰蛋白测试盒(批号：20120312、20120317、20120314、20120319)均购自南京建成生物工程研究所；TUNEL法检测试剂盒(批号：14751125471)购自美国Roche公司；c8000全自动生化分析仪购自美国Abbott Laboratories公司；722型分光光度计购自上海第三分析仪器厂；Biofuge Stratos台式高速低温离心机(德国Heraeus公司)。
1.2 实验动物及分组
80只健康Wistar大鼠，雄性，6月龄，体重220～289 g，平均(245±25)g，购自河南省实验动物中心。将其随机均分为假手术组、IRI模型组、巴戟天高剂量组和巴戟天低剂量组4组，每组各20只。
1.3 给药方法
各组大鼠均正常饲养，巴戟天高、低剂量组大鼠均连续灌胃给予一定浓度的巴戟天醇提物3.0 g/(kg·d)、1.5 g/(kg·d)，而假手术组和IRI模型组大鼠仅给予生理盐水灌胃，用药7 d后，建立肾IRI模型。肾IRI模型建立方法：大鼠禁食12 h后，腹腔注射2%戊巴比妥钠(0.2 μL/g)麻醉；常规消毒和术前准备；于下腹部正中做一长约2.5 cm的切口，进入腹腔，向上提起肾脏，并切除右侧肾脏；用无创小血管夹夹闭左侧肾动脉，使之缺血1 h，然后再复灌4 h，此时模型制作完毕。其中假手术组仅做腹部切口，游离双侧肾脏，分离双侧肾脏动脉。其余3组均按上述步骤制作肾IRI模型。
1.4 BUN、Cr、SOD、GSH-Px和MDA水平及肾脏组织病理变化的观察
灌流结束后，每组取10只大鼠，采集静脉血3 mL，4℃下以3 000 r/min离心15 min，检测BUN及Cr水平；然后将这10只大鼠腹腔注射2%戊巴比妥钠麻醉，取出左侧肾脏，称取100 mg用生理盐水制成匀浆，4℃下以3 000 r/min离心15 min，取适量上清液，检测SOD、GSH-Px和MDA水平，其中总蛋白检测采用考马斯亮兰法 ......
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