超顺磁性纳米铁标记大鼠骨髓基质干细胞的实验研究(2)
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2 结果
2.1 细胞生长情况
原代细胞48 h半换液，见大量悬浮细胞，在瓶底可见单个细胞贴壁生长，多为短多角形。个别细胞伪足伸长，4 d全量换液，PBS漂洗，去除大量漂浮的细胞，可见分散的BMSCs成簇生长为集落状，细胞逐渐转变为长梭形，纺锤状，胞核为圆形或椭圆形，胞浆内可见较多的颗粒(图1a)。10 d左右细胞大部分融合，达90%以上，细胞形态均匀，长梭形，排列紧密，呈旋涡状，有一定的方向性。传代后，细胞形态类似纤维状，排列更加整齐(图1b)。
2.2 BMSCs的免疫荧光鉴定
BMSCs经免疫荧光染色，绝大多数细胞呈CD105、CD166、CD90(间质干细胞特征性标志物)阳性，CD45呈阴性。见图2。
2.3 SPIO-BMSCs标记鉴定
2.3.1 普鲁士蓝铁染色
普鲁士蓝染色见细胞染色阳性率>99%，表现为细胞内有大量蓝染颗粒，部分聚集成团，颗粒分布以核周和靠近细胞膜处较为明显(图3)。
2.3.2 透射电镜检查
透射电镜观察标记的细胞胞质内见高电子密度颗粒聚集，主要位于各级溶酶体内(图4)。
2.4 SPIO-BMSCs活性
2.4.1 台蓝染色SPIO-BMSCs活细胞计数
实验组1的SPIO浓度为15 mg/L时，活细胞比率与对照组相比差异无统计学意义(P > 0.05)，但在实验组2和实验组3，当SPIO浓度为25、50 mg/L时活细胞比率有所降低(P < 0.05) ......
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