胃癌肝高转移潜能细胞特异性结合肽与肿瘤坏死因子的融合与鉴定
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2013年9月25日
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呼圣娟 姜荣兴 沈皓 师红利 王铁武 宁夏回族自治区银川市第一人民医院消化内科;宁夏医科大学;宁夏人民医院消化内科;
【摘要】目的将胃癌肝高转移潜能细胞特异性结合肽pd20与人肿瘤坏死因子α(TNF-α)进行基因融合,并构建原核表达载体,表达pd20-TNF-α融合蛋白。方法利用全基因合成法制备pd20-TNF-α融合基因,构建pd20-TNF-α原核表达载体,在大肠杆菌BL21中进行诱导表达。对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析和Western blot检测分析。结果成功构建了pd20-TNF-α重组融合质粒,表达的蛋白经SDS-PAGE电泳分析,在相对分子质量约21 000处出现了1条新生的蛋白条带,转印NC膜后该融合蛋白可与抗TNF-α单克隆抗体特异性结合。结论成功构建了pd20-TNF-α基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行诱导表达,为下一步融合蛋白的纯化奠定了实验基础。
【关键词】 基因融合 原核表达载体 重组融合蛋白 鉴定
【基金】国家自然科学基金资助项目(编号81060193)
【分类号】R735.2
肿瘤坏死因子α(TNF-α)是一种多功能的细胞因子,对多种肿瘤具有明显的抑制作用,但是由于全身用药,副作用较大,限制了它的临床应用。笔者曾采用噬菌体随机肽库筛选技术,筛选到可与胃癌肝高转移潜能细胞特异性结合的线性多肽分子GRRTRSRRLRRS(pd20),实验证实pd20可与胃癌肝高
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