三氧化二砷联合维A酸对恶性黑色素瘤细胞株A375的增殖、迁移能力影响及其可能分子机制的探讨(2)
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黑色素瘤是一类具有高度恶性生物学行为的皮肤肿瘤，来源于皮肤基底部的黑色素细胞。近年来，我国的黑色素瘤发病率不断升高，年发病例数已超过10 000例[1]。早期发现的患者可通过手术切除；中晚期患者则缺乏有效的治疗手段，手术切除困难，化疗效果不佳。基于黑色素瘤增殖、迁移等恶性生物学行为，探寻能够抑制该生物学行为的治疗方式具有积极的临床应用前景[2]。本研究通过培养恶性黑色素瘤细胞株A375来分析三氧化二砷(As2O3)联合维A酸对其增殖、迁移能力影响及其可能的分子机制，现报道如下：
1 材料与方法
1.1 材料
恶性黑色素瘤细胞株A375购买于中科院细胞库；DMEM培养基和胎牛血清均购买于Gbico公司；抗体购买于Abcam公司；离心管和细胞培养板购买于Corning公司；全反式维A酸(at-RA)、As2O3等药品购买于Sigma公司。
1.2 方法
1.2.1 细胞复苏和培养方法 将细胞从液氮罐中取出后迅速置于37℃水浴锅中，并将细胞悬液移入15 mL离心管中，1000 r/min离心10 min，弃上清后用5 mL含10%胎牛血清的DMEM培养基重悬，移入培养瓶中在37℃、5%CO2孵箱中培养。当细胞铺满70%～80%且处于对数生长期时，用胰酶常规消化，传代并接种于12孔板。
1.2.2 细胞处理方法 当12孔板内细胞铺满70%～80%后，将含血清的DMEM更换为不含血清的DMEM培养24 h，而后分别用不含药物的DMEM(空白对照组)、10 μmol/L As2O3(As2O3组)、10 μmol/L at-RA(at-RA组)、10 μmol/L As2O3联合10 μmol/L at-RA(As2O3+at-RA组)处理 ......
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