当前位置: 首页 > 期刊 > 《医药产业资讯》 > 2014年第2期 > 正文
编号:12706153
绞股蓝皂苷对人衰老皮肤成纤维细胞抗氧化酶活性的影响(2)
http://www.100md.com 2014年1月15日 丛敬 郭丽(等)
第1页

    参见附件。

     1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    皮肤标本3例,取自施行眼袋切除术和倒睫矫正术的老年女性眼睑周围的正常皮肤,年龄55~60岁,由中国医科大学第四附属医院眼科提供。绞股蓝皂苷,成都曼思特生物科技有限公司;DMEM培养基、胎牛血清,美国GIBCO公司;胰蛋白酶,美国Sigma公司;磷酸盐缓冲液,中国北京中杉金桥生物技术有限公司;超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒,南京建成生物医学工程研究所;其他试剂为国产分析纯。

    1.2 实验方法

    1.2.1 建立细胞系及分组 皮肤标本用胶原酶消化,置37℃,5%CO2培养箱中植块法原代培养,建立衰老的人皮肤成纤维细胞系。实验选用第3~6代细胞,分为0、5、10、15 mg/L绞股蓝皂苷组,即A、B、C、D组,给予对应浓度的绞股蓝皂苷处理细胞,24、72、96 h后,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖情况;72 h后,检测SOD、CAT、GSH-Px活性。

    1.2.2 制备绞股蓝皂苷 取0.1 g绞股蓝皂苷溶于1 mL二甲基亚砜(DMSO),配成0.1 mg/L的贮存液,DMEM培养液倍比稀释,使其终浓度分别为5、10、15 mg/L。

    1.2.3 MTT法检测细胞增殖 制备单细胞悬液,接种于96孔板上,分别加入绞股蓝皂苷0、5、10、15 μg/mL,同时根据DMSO的浓度做相应溶剂对照,每组细胞的药物浓度孔及相应溶剂对照孔均做5复孔。另做1孔不加细胞,只加培养液和绞股蓝皂苷。共做3块培养板。培养24、72、96 h各取出1块培养板,MTT法检测各孔吸光度值[4]。

    1.2.4 细胞抗氧化酶活性测定 分别收集各组细胞 ......

您现在查看是摘要介绍页,详见PDF附件