李氏膈食散体外抗肿瘤实验研究(2)
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1.2 细胞系
人肝癌细胞(HepG-2)、人胃癌细胞(MKN-45)、人食道癌细胞(EC-109)，均购自中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心。
1.3 试剂仪器
95%乙醇(分析纯，北京化工厂)，DMSO(分析纯，北京化工厂)，RPMI 1640培养基(Solarbio公司，中国)，胰蛋白酶(Solarbio公司，中国)，胎牛血清(Gibco公司，美国)，磷酸盐缓冲液(Thermo公司，德国)，噻唑蓝(MTT)试剂(Gibco公司，美国)。纯水仪(Millipore公司，美国)，96孔细胞培养板(Thermo公司，德国)，倒置显微镜(OLYMPUS公司，日本)，二氧化碳培养箱(Thermo公司，德国)，连续波长酶标仪(BIO-TEK，美国)。
2 方法与结果
2.1 李氏膈食散水提取物的制备
称取李氏膈食散生药粉末10 g，加10倍量水回流提取3次，每次30 min，过滤，滤液合并，真空干燥，得到李氏膈食散水提物，得率为16.8%。
2.2 李氏膈食散乙醇提取物的制备
称取李氏膈食散生药粉末10 g，加10倍量95%乙醇溶液回流提取3次，每次30 min，过滤，滤液合并，真空干燥，得到李氏膈食散乙醇提取物，得率为10.5%。
2.3 李氏膈食散水提物或醇提物抑制肿瘤细胞生长的测定
取对数生长期的肝癌细胞株(HepG-2)、胃癌细胞株(MKN-45)以及食道癌细胞株(EC-109)消化计数后接种于96孔培养板中，每孔8000～10 000个细胞，培养12 h，弃去培养液，加入不同浓度的含药培养基100 μL继续培养24 h，吸出培养液，每孔加入150 μL磷酸盐缓冲溶液加入100 μL 0.5 g/L的MTT溶液，继续培养4 h候弃去MTT溶液，每孔加入150 μL DMSO溶解，平板震荡仪震荡15 min，在酶标仪上用波长570 nm ......
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