激活态雪旺细胞对神经干细胞分化作用的研究(1)
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哈尔滨医科大学附属第四医院骨科，黑龙江哈尔滨 150086
[摘要] 目的 探讨激活态雪旺细胞(SCs)对神经干细胞(NSCs)的分化作用。 方法 取出生24 h内的SD乳鼠脊髓NSCs，分离培养并传至4代。取体重(100±5)g的SD大鼠，结扎右侧坐骨神经，1周后取双侧坐骨神经，左侧提取正常坐骨神经分离培养SCs(普通SCs)，右侧提取结扎变性的坐骨神经分离培养SCs(激活态SCs)，均采用双酶消化加差速贴壁法。将SCs与NSCs应用Transwell培养皿联合培养，分为三组：A组为激活态SCs与NSCs；B组为普通SCs与NSCs；C组仅为NSCs。于培养的第2、4、6天检测各组NSCs活性。1周后，Western blot检测各组SCs表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达水平，免疫荧光检测各组NSCs分化比例。 结果 传至4代的NSCs生长稳定，分离的SCs 7 d后大量增殖呈旋涡状。联合培养后MTT法检测细胞活性，第2、4天三组细胞的活性差异无统计学意义(P > 0.05)，第6天C组活细胞比例开始降低，A、B组与C组比较差异有统计学意义(P < 0.05)，A组与B组比较差异无统计学意义(P > 0.05)。Western blot检测A组细胞表皮生长因子(EGF)表达水平(0.486±0.028)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达水平(0.385±0.023)均高于B组，差异有统计学意义(P < 0.05)。MAP-2荧光染色，每高倍视野阳性细胞比例A组[(35.26±2.53)%]高于B组[(27 ......
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张睿 张军 赵承斌 哈尔滨医科大学附属第四医院骨科;
【摘要】目的探讨激活态雪旺细胞(SCs)对神经干细胞(NSCs)的分化作用。方法取出生24 h内的SD乳鼠脊髓NSCs,分离培养并传至4代。取体重(100±5)g的SD大鼠,结扎右侧坐骨神经,1周后取双侧坐骨神经,左侧提取正常坐骨神经分离培养SCs(普通SCs),右侧提取结扎变性的坐骨神经分离培养SCs(激活态SCs),均采用双酶消化加差速贴壁法。将SCs与NSCs应用Transwell培养皿联合培养,分为三组:A组为激活态SCs与NSCs;B组为普通SCs与NSCs;C组仅为NSCs。于培养的第2、4、6天检测各组NSCs活性。1周后,Western blot检测各组SCs表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达水平,免疫荧光检测各组NSCs分化比例。结果传至4代的NSCs生长稳定,分离的SCs 7 d后大量增殖呈旋涡状。联合培养后MTT法检测细胞活性,第2、4天三组细胞的活性差异无统计学意义(P0.05),第6天C组活细胞比例开始降低,A、B组与C组比较差异有统计学意义(P0.05),A组与B组比较差异无统计学意义(P0.05)。Western blot检测A组细胞表皮生长因子(EGF)表达水平(0.486±0.028)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达水平(0.385±0.023)均高于B组,差异有统计学意义(P0.05)。MAP-2荧光染色,每高倍视野阳性细胞比例A组[(35.26±2.53)%]高于B组[(27.63±3.45)%],差异有统计学意义(P0.05);GFAP荧光染色,每高倍视野阳性细胞比例A组[(62.42±3.78)%]低于B组[(70.18±1.26)%],差异有统计学意义(P0.05)。结论激活态SCs能够促进NSCs向神经元的分化进程,提高神经元的分化比例。
【关键词】 雪旺细胞 神经干细胞 细胞分化 联合培养 神经元
【基金】黑龙江省自然科学基金项目(编号D200901) 黑龙江省教育厅科技研究项目(编号11531160)
【分类号】R329
周围神经损伤是骨科常见的疾病之一,虽然周围神经具有一定的再生能力,但对于较大缺损却很难自身修复[1]。随着组织工程学领域研究的深入,神经干细胞(NSCs)已被公认为是对神经损伤修复的有效方法,通过NSCs在神经断端的不断分化,使受损的周围神经重新恢复连接。然而单纯形态学得
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