胃癌组织中PIM—3的异常表达及临床意义(2)
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1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2013年6月～2014年2月于内蒙古医科大学附属医院(以下简称“我院”)行胃癌组织根治性切除的手术患者50例为研究对象，其中低分化胃癌25例，年龄38～72岁，平均(54.2±14.1)岁，男16例，女9例；高-中分化患者25例，年龄42～70岁，平均(52.8±15.1)岁，男15例，女10例。排除曾经接受放疗或者化疗等方面治疗的患者。随机在50例胃癌组织周围采集25例患者的癌旁组织，其中男15例，女10例。癌旁常组织取自患者癌组织范围2.5 cm以外的区域，经切片病理染色分析证实均无癌变细胞，患者的个人基本资料和肿瘤相关参数来源于我院病案室。本研究经我院伦理委员会通过，患者均知情同意并签署知情同意书。
1.2 方法
主要试剂为羊抗人PIM-3多克隆抗体(美国Santa Cruz公司)， 浓度为1∶200。①制作切片：包埋组织每份制作切片1和切片2，每片厚度约4 μm。②切片1处理：常规脱蜡至水后缓冲液冲洗3 min×2 次，Hydrogen Peroxide Block中孵育12 min，缓冲液洗5 min×2次，Ultra V Block背景染色，缓冲液洗5 min×2 次，滴加一抗工作液 37℃孵育1.5 h，缓冲液洗5 min×2次，Primary Antibody Enhancer室温下孵育20 min，缓冲液洗5 min×2次，加辣根过氧化物酶聚合物室温下孵育30 min，缓冲液洗5 min×2次，1 mL 二氨基联苯胺(DAB)Plus Substrate中滴加 1～2滴DAB Plus Chromogen混匀后滴加到切片上 ......
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