赤芍水提物对肺癌细胞的抑制效应研究(2)

http://www.100md.com 2014年12月25日 中国医药导报2014年第36期

     1.4 CCK-8检测细胞增殖

    A549、H1299细胞按3×103接种于96孔板，加入不同浓度梯度(0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0 g/L)的赤芍水提物，37℃，5%CO2，培养24、48、72 h，培养体系为100 μL，培养基为DMEM(A549)及1640(H1299)，培养液含有10%新生小牛血清(Gibco，美国)，每孔加入10 μL CCK检测试剂，4 h后酶标仪扫描，扫描波长为450 nm，每个浓度组样本数为6。

    1.5 细胞划痕实验

    A549、H1299细胞按5×104接种于6孔板，37℃，5%CO2，培养24 h，于每孔中间划一均匀大小的划痕，加入0.5 g/L浓度的赤芍水提物，继续培养24 h，光镜下观察细胞爬行能力。

    1.6 流式细胞学细胞周期检测

    A549、H1299按5×104接种于6孔板，加入0.5 g/L浓度的赤芍水提物，37℃，5%CO2，培养24 h，收集细胞，采用细胞周期试剂盒(碧云天)进行染色，上流式检测细胞周期。

    1.7 动物处理

    将10只C57BL/6黑鼠随机分为对照组(5只，生理盐水灌胃，每天200 μL/只)，赤芍组(5只，赤芍水提物200 g/L灌胃，每天200 μL/只)。每只小鼠腋下皮下接种3×106 LLC细胞。第2天赤芍组予赤芍水提物200 g/L灌胃，每天1次 ......