稳定抑制PAK2蛋白表达的HUH—7细胞株的建立(2)

http://www.100md.com 2015年9月25日 中国医药导报2015年第27期

     RNA干扰(RNAi)目前广泛应用于基因功能机制研究、基因治疗、抗病毒治疗、药物研发及肿瘤研究等方面，是一种经济、快捷、高效的抑制基因表达的技术手段。本研究拟采用该技术，将设计好的PAK2的三个shRNA质粒转染至HUH-7肝癌细胞系，为下一步研究PAK2在肝癌中的功能及机制提供细胞模型。

    1 材料与方法

    1.1 细胞系、病毒载体、菌株

    人肝癌细胞系HUH-7购于上海中国科学院生物学研究所；pHBLV-U6-ZsGreen-Puro病毒载体人肾胚细胞(293T细胞)由上海汉恒生物提供；大肠埃希菌菌株DH5-α由Invitrogen购入。

    1.2 主要试剂

    胎牛血清、胰蛋白酶、DMEM、PBS、lipofectamine 2000购自Invitrogen(美国)；质粒DNA大抽提取试剂盒购自Qiagen(德国)；限制性内切酶、T4连接酶、DNA ladder购自Fermentas(立陶宛)；真核转染试剂由上海汉恒生物公司提供；质粒DNA抽提试剂盒购自康为世纪；凝胶回收试剂盒购自Axygen(美国)；琼脂糖、琼脂粉由上海汉恒生物公司提供；PAK2抗体(ab1179)及GAPDH抗体(ab9485)购自Abcam(英国) ......