微囊化肝细胞移植代偿肝功能的实验研究(2)

http://www.100md.com 2016年1月5日 中国医药导报2016年第1期

     1.2 方法

    1.2.1 动物 清洁级雌性SD大鼠34只，6周龄，体重130～150 g，由中山大学实验动物中心提供。标准鼠食，自由饮水，饲养1周后用于实验。

    1.2.2 肝细胞来源及细胞计数 正常大鼠肝细胞株BRL，由中山大学实验动物中心提供。将生长状态良好的BRL肝细胞株用0.25%胰蛋白酶消化，采用4%台盼蓝染色鉴定细胞活性，细胞计数板计算细胞数目，细胞活力98%以上方可用于实验。

    1.2.3 微囊化肝细胞的制备 将2%海藻酸钠/肝细胞混悬液加入自制微囊发生装置(图1)，用毛细管破碎法得到微囊化肝细胞，微囊呈圆形，形状较规则、大小较均一，平均直径约0.7 mm。

    图1 毛细管破碎法实验装置

    1.2.4 急性肝功能衰竭模型的建立及动物分组 将实验所用34只SD大鼠禁食12 h后，以造成肝功能衰竭病变的最佳剂量D-氨基半乳糖胺(D-gal)1.4 g/kg一次性腹腔注射构建大鼠急性肝功能衰竭模型。实验动物随机分为三组：①微囊组(9只)：造模成功后12 h经腹腔移植微囊化正常鼠肝细胞株BRL。②游离组(10只)：造模成功后12 h经腹腔移植游离正常鼠肝细胞株BRL ......